[实用新型]用于检测EGFR基因热点突变T790M的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于分子生物学技术领域，涉及基因突变检测试剂盒，尤其涉及一种用于检测EGFR基因热点突变T790M的试剂盒。

背景技术

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是一种跨膜受体酪氨酸激酶，属于受体酪氨酸激酶（tyrosine kinase，TK）erbB／HER家族的一个成员，EGFR的激活即磷酸化对调节肿瘤细胞的生长、侵袭、转化、存活、血管生成及转移具有重要意义，研究表明，EGFR在许多恶性肿瘤中过高表达。

近年来，随着医学分子生物学的发展，分子靶向治疗作为恶性肿瘤治疗的新手段，正日益受到临床工作者们的重视，因此，EGFR作为恶性肿瘤治疗的分子靶标而受到普遍关注。目前已开发出了吉非替尼（gefitinib）和厄洛替尼（erlotinib）等表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosine kinases inhibitor，EGFR-TKI），然而在临床中，有些患者对EGFR-TKI的治疗并不敏感或对该类药物产生耐药，故对EGFR-TKI耐药机制的探索成为国内外研究的热点。有研究结果显示，20号外显子突变为M（T790M，threonine at position790）是肿瘤对gefitinib和erlotinib获得性耐药的重要原因。因此，在一线治疗的恶性肿瘤患者中检测EGFR基因热点突变T790M具有重要的临床意义，是决定患者是否能够应用EGFR-TKI治疗的先决条件。

目前检测EGFR突变主要通过直接测序法，该方法需要通过石蜡组织DNA提取，再进行PCR扩增、测序，最后对测序数据进行分析。这个方法对石蜡包埋组织标本要求高，要求标本中肿瘤组织含量达20%以上，检测敏感度低，检测流程复杂繁琐，对数据分析要求高，且目前无商用试剂盒，对实验室的仪器配备要求也较高。

实用新型内容

为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测EGFR基因热点突变T790M的试剂盒，可以快速、准确地检测EGFR基因热点突变T790M。

为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是：一种用于检测EGFR基因热点突变T790M的试剂盒，包括盒体（1）、盒盖（2）和设置在盒体（1）内的衬垫（3），所述衬垫（3）上设有小孔，装有EGFR20-F1引物的试剂管（4）、装有EGFR20-R1引物的试剂管（5）、装有EGFR20-F2引物的试剂管（6）、装有EGFR20-R2引物的试剂管（7）、装有酶切缓冲液的试剂管（8）、装有PCR扩增试剂的试剂管（9）、装有BSA溶液的试剂管（10）、装有内切酶BstUⅠ的试剂管（11）、装有内切酶Nla III的试剂管（12）、装有阴性对照的试剂管（13）、装有阳性对照的试剂管（14）被设置在所述小孔内。

其中，所述试剂盒还包括：装有去离子水的试剂管（15）。

其中，所述阴性对照为EGFR20野生型DNA，所述阳性对照为EGFR20T790M突变型DNA。

其中，所述衬垫（3）上设有12个小孔，所述小孔在所述衬垫（3）上分成三排平行排列。

其中，引物浓度为5～10μmol/L，所述引物的序列如下：