[实用新型]一种量子点标记的试条卡

说明书

技术领域

本实用新型属于体外诊断领域，具体涉及一种自身带有被检物标准曲线或系数参数等检测用信息、结合具有信号检测功能的仪器能快速定量样品单一组分或多组分浓度的量子点标记的试条卡。

背景技术

胶体金免疫层析技术（Gold-Immunochromatography Assay，GICA）现已广泛应用于免疫检测的各个方面，其以微孔滤膜为载体，利用微孔滤膜的毛细管作用，使滴加在膜条一端的液体样品慢慢向微孔滤膜另一端渗移，若液体中有特异抗原或抗体，它们可以和免疫金结合后再与包被在微孔滤膜上的相应抗体或抗原结合而显示免疫金颜色（红色）。该技术简单快速，几分钟就能用肉眼观察结果。不足之处是：（1）只能定性检测样品，难能实现样品定量。（2）难能做到样品多组分同时检测，检测效率低。（3）对于某些抗原或抗体含量极低的样本，胶体金颜色很浅很难用肉眼判断结果，检测灵敏度低。

实现样品多组分快速定量检测，一直是人们长期追求的目标。近年发展的纳米量子点（quantum dots, QDs），具有独特优良光学性质：荧光发光效率高，激发谱线范围宽，能“一元激发，多元发射”，发射谱线范围窄且对称，光漂白速度慢，荧光寿命长，粒径与生物分子相近，表面修饰后能多功能化，不同粒径和种类的量子点混合物产生的特征波长荧光光谱不交叠，非常适于样品多组分分析。Sweeny等将三种一抗分别与三种不同发射波长的量子点(λem=705nm，605nm和655nm)通过生物素-亲和素的特异性结合形成抗体-量子点复合物，通过荧光成像实现了扁桃体中3种不同抗体的同时分析，证明应用多色量子点可在同一样品中同时定位多种生物标志物。Nie等用4种不同发射波长的量子点标记4种抗体实现了对霍奇金淋巴瘤中病理标志性细胞HRS（Hodgkin’s and Reed-Sternberg）的成像检测，提高了检测灵敏度和特异性，有利于临床快速准确地诊断霍奇金淋巴瘤。Kobayashi等和Chan等分别用两种不同颜色的近红外量子点成像分析小鼠的淋巴管流路和左右胸腔，证明了近红外量子点的多重成像分析作用。利用量子点的荧光特性除了进行成像分析外还可以实现对多种病原体、毒素、抗原、抗体、酶、小分子物质以及离子等的定性定量分析。Zahavy等制备荧光探针QD585-IgGαB.anthracis和QD655-IgGαY.pestis，结合流式细胞仪实现了两种致病菌的同时定量检测，检测限可达到10³cfu/mL。Goldman课题组用多色量子点实现了葡萄球菌产生的肠毒素B和2,4,6-三硝基甲苯以及霍乱毒素、蓖麻毒素、志贺毒素和葡萄球菌毒素四种毒素的同时检测。除此之外，在微流体蛋白质芯片中用量子点作荧光标记，利用其荧光多色性能够同时快速检测肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)和甲胎蛋白(AFP)，检测限低至250fmol/L，比用有机荧光染料检测高4个数量级。Giorgio等将血管内皮生长因子A（VEGF A）和血管生成素（angiopoietin）分别与不同发射波长的量子点构成荧光探针，通过抗原抗体特异性结合反应引起量子点的聚集，用流式细胞仪定量检测特征荧光信号从而得到相应抗原的浓度，检测限为1pmol/L，实现了多种抗原的同时检测。近些年来，不少研究者利用量子点编码的方法进行多组分分析。这一技术主要是借助量子点荧光颜色和荧光强度的丰富性进行编码，能够同时测定更多的组分，可实现对蛋白质分析、DNA 分析及药物筛选等研究中所蕴藏的海量信息的同步分析。理论上，n种强度m种颜色能够产生n^m-1种代码，利用解码技术可以实现对n^m-1种目标物的分析检测。根据计算，只需用5～6种颜色与6种不同发光强度的量子点纳米粒子进行组合，就能得到10000～40000个可识别的纳米粒子编码微球。如果与10种不同发光强度的量子点纳米粒子进行组合，则能得到100万个可识别的纳米粒子编码微球，这些微球理论上可以对100万个不同的DNA或蛋白质进行编码标记，从而实现对样品中的100万个不同的DNA或蛋白质进行同时检测！Nie等将红、绿、蓝三种不同颜色的量子点以1:1:1、1:2:1、2:1:1 的比例包裹入聚苯乙烯微球进行编码，通过所得荧光光谱的不同特性实现了三种目标DNA的同时检测。采用类似技术，Gu和Sha等将两种不同发射波长的量子点以三种强度分别对DNA敏感型的水凝胶和微球进行编码分别实现了多种不同序列的单链DNA的定量检测和多种寡核苷酸的高通量筛选分型。Wilson和Cooper等分别利用此技术实现了三种血清蛋白（鸡卵白蛋白OVA、牛血清白蛋白BSA、人血清白蛋白HAS）以及四种免疫球蛋白G（人IgG、兔IgG、鼠IgG、羊IgG）的同时检测。