[发明专利]用于评估具有嗜淋巴特性的病毒的存活力的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测具有低浓度病毒颗粒的生物基质中具有嗜淋巴特性的病毒、评估它们的存活力和消除EIA和PCR测试的假阴性结果的方法，并且可用于医疗行业和生物技术中。

背景技术

通过在细胞培养物中分离而检测生物基质中的病毒是众所周知的方法。通过细胞培养方法分离的病毒通过血球吸附、血细胞凝集或间接免疫荧光方法来鉴定。适当采样和在适当介质上短时转运至实验室场地对于培养物中病毒分离的有效分离是必不可少的。它保留了病毒存活力，并限制细菌和真菌繁殖(病毒感染的实验室诊断，在线：http：//www.center-hc.ru/)。许多病毒，特别是乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)是只影响人类细胞、因此只引起人类疾病的人类病毒(anthroponotic viruses)。这些感染没有实验模型。此外，特别是在乌兹别克斯坦共和国没有可以体外充分研究这些病毒的细胞病变特性和存活力的培养的细胞培养物。而且，由于其复杂性，在细胞培养物上分离病毒的方法不用于诊断目的。

用于检测生物材料中的病毒的免疫学方法被称为酶联免疫吸附试验(ELISA)，其基于通过检测几种病毒抗原的抗体并使用从感染细胞提取或通过基因工程产生的特定病毒蛋白(Ilyina，E.N.et.al.Chronic virus liver diseases“Khronicheskiye virusnye zabolevaniya pecheni”Methodological manual for physicians“Metodicheskoye posobiye dlya vrachej”Moscow，2001，p.7-11)。

在一些病毒感染例如HCV中，EIA只检测抗体，因此显著限制了评估感染的进展和活跃度的能力。此外，EIA具有灵敏度阈值，低于该阈值，病毒的检测是不可能的。

与声称的检测生物材料中具有嗜淋巴特性的病毒的方法最接近，病毒存活力评估以及EIA和PCR的假阴性结果的排除是通过采样生物材料检测病毒RNA或DNA和通过聚合酶链式反应(PCR)检测病毒RNA或DNA的存在(Ilyina，E.N.et.al.Chronic virus liver diseases “Khronicheskiye virusnye zabolevaniya pecheni”Methodological manual for physicians“Metodicheskoye posobiye dlya vrachej”Moscow，2001，p.7-11)。

该方法涉及在生物材料中检测病原体的直接方法，从而允许评估病毒过程的活跃度。阳性PCR反应高概率地证实了肝和血液中病毒的存在。生物样品(血浆或血液蛋白，组织或器官的活检材料)的PCR并不总是能够检测由具有嗜淋巴特性的病毒引起的感染，尽管这种病毒可以在淋巴组织以明显高浓度存在(PCR的假阴性结果)，反之亦然，阳性PCR可以在没有病毒存在的情况下获得。此外，PCR具有灵敏度阈值，低于该阈值，该方法无法检测病毒存在。

发明内容

本发明的目的是增加由具有嗜淋巴特性的病毒引起的感染检测的可靠性，消除通过EIA和PCR测试血液中嗜淋巴病毒的存在的假阴性结果，检测病毒浓度低于IFA或PCR方法灵敏度阈值的生物材料中具有嗜淋巴特性的病毒。

指定的目标通过以下解决：通过采样生物材料评估具有嗜淋巴特性的病毒的存活力，通过聚合酶链式反应(PCR)检测病毒RNA或DNA的存在；另外从健康人血液获得淋巴细胞悬液并添加等量的生物材料；将混合物搅拌，并在37℃孵育6-8小时；从血浆洗出淋巴细胞并破坏淋巴细胞；将淋巴细胞的细胞质进行PCR测试。在淋巴细胞的细胞质中检测到病毒RNA或DNA表明病毒的保存的存活力；淋巴细胞的细胞质中不存在病毒RNA或DNA表明病毒的灭活。血浆或血清，组织或器官的活检样品，来自医疗器械的洗出物可以用作生物样品。这种方法允许评估HBV、HCV或HIV病毒的存活力。

指定的目标通过以下解决：通过从怀疑被嗜淋巴病毒感染的患者获得血液消除EIA和PCR假阴性结果，并将6-8ml血液采样到含有2，0ml生理盐水和2-3滴肝素的试管中；从血液中分离淋巴细胞，并在37℃孵育6-8小时；从血浆洗出淋巴细胞并破坏，并且将淋巴细胞的细胞质进行PCR；在淋巴细胞的细胞质中检测到病毒RNA或DNA表明病毒的存在；淋巴细胞的细胞质中不存在病毒RNA或DNA表明血液中不存在病毒。将患者的淋巴细胞的内容物进行PCR测试。