[发明专利]用于改进核酸合成反应的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于改进核酸合成反应的反应性的方法、用于核酸合成反应的组合物，和用于核酸合成反应的反应缓冲液。

背景技术

核酸合成方法，特别是聚合酶链反应（PCR）方法是用于在试管中简单扩增目的核酸片段的技术，并且近来不仅成为用于遗传研究的重要实验手段，还成为了生物、医学和农业广泛领域中的重要实验手段。

使用DNA聚合酶的核酸合成反应，如PCR在其反应性如特异性方面经常有问题。为了避免非特异性的核酸合成反应，尝试开发新型DNA聚合酶、改进引物设计方法、优化反应溶液组成、添加化合物等。例如，发现添加甜菜碱在扩增富含CG的模板中有效（非专利参考文献1和2）。

引用列表

非专利参考文献

非专利参考文献1:    American Journal of Human Genetics, 1994年9月1日, 第55卷, 附录第3号, 第A238页

非专利参考文献2:    Nucleic Acids Research, 1997年10月1日, 第25卷, 第19号, 第3957-3958页。

发明概述

本发明待解决的问题

已经尝试改进核酸合成反应的反应性。然而，核酸合成反应可能仍然伴随有非特异性反应或可能不能合成足够量的DNA。由于这些原因，需要核酸合成反应的反应性中的进一步改进。本发明的目标是提供用于改进核酸合成反应的反应性的方法、用于核酸合成反应的组合物、和用于核酸合成反应的反应缓冲液。

问题的解决方案

本发明人发现可以通过向反应溶液添加ω-氨基酸来改进核酸合成反应的反应性。因此，完成本发明。

即，本发明涉及：

[1] 用于改进核酸合成反应的反应性的方法，其包括向反应溶液添加ω-氨基酸的步骤；

[2] 根据[1]的方法，其中所述ω-氨基酸是下式1代表的化合物：

[化学式1]

其中n是2或更大的整数；

[3] 根据[2]的方法，其中n是2到7的整数；

[4] 根据[1]的方法，其中所述核酸合成反应是聚合酶链反应；

[5] 根据[1]的方法，其包括制备反应溶液的步骤，所述反应溶液含有ω-氨基酸、DNA聚合酶、至少一条引物和至少一种脱氧核糖核苷酸三磷酸；

[6] 根据[1]的方法，其进一步包括向所述反应溶液中添加甜菜碱的步骤；

[7] 用于核酸合成反应的组合物，其含有：DNA聚合酶、反应缓冲剂、至少一条引物和至少一种脱氧核糖核苷酸三磷酸和ω-氨基酸；

[8] 根据[7]的组合物，其中所述ω-氨基酸是由如[2]中定义的式1代表的化合物；

[9] 根据[7]的组合物，其进一步含有甜菜碱；

[10] 用于核酸合成反应的反应缓冲液，其含有ω-氨基酸；

[11] 根据[10]的反应缓冲液，其中所述ω-氨基酸是由如[2]中定义的式1代表的化合物；

[12] 根据[10]的反应缓冲液，其进一步含有甜菜碱；

[13] 用于核酸合成反应的试剂盒，其包含以下组分：

DNA聚合酶，

反应缓冲剂，

至少一种脱氧核糖核苷酸三磷酸，和

ω-氨基酸；

[14] 根据[13]的试剂盒，其中所述ω-氨基酸是由如[2]中定义的式1代表的化合物；

[15] 根据[13]的试剂盒，其进一步包含甜菜碱。

发明效果

根据本发明，提供了用于改进核酸合成反应的反应性的方法、用于核酸合成反应（其具有极佳的反应性）的组合物、和用于核酸合成反应的反应缓冲液。

附图简述

[图1] 图1显示了实施例1中琼脂糖凝胶电泳的结果。

[图2] 图2显示了实施例2中琼脂糖凝胶电泳的结果。

[图3] 图3显示了实施例3中琼脂糖凝胶电泳的结果。

[图4] 图4显示了实施例4中琼脂糖凝胶电泳的结果。

[图5] 图5显示了实施例5中琼脂糖凝胶电泳的结果。

实施本发明的方式