[发明专利]以计算方式优化的H3N2、H2N2和B型流感病毒的广泛反应性抗原

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2012年2月7日提交的美国临时申请No.61/596,014的优先权，所述临时申请以引用的方式全文纳入本文。

技术领域

本公开内容涉及可引起针对H3N2、H2N2或B型流感病毒的广泛反应性的免疫应答的优化的流感血凝素蛋白及其作为疫苗的用途。

背景技术

流感病毒是正粘病毒科(Orthomyxoviridae)家族的成员。有三个亚型的流感病毒，命名为A型流感、B型流感和C型流感。所述流感病毒粒体含有分段的负义(negative sense)RNA基因组，所述基因组编码以下蛋白：血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质(M1)、质子离子通道蛋白(M2)、核蛋白(NP)、聚合酶碱性蛋白1(PB1)、聚合酶碱性蛋白2(PB2)、聚合酶酸性蛋白(PA)和非结构蛋白2(NS2)。HA、NA、M1和M2为膜相关蛋白，而NP、PB1、PB2、PA和NS2为核衣壳相关蛋白。M1蛋白是流感颗粒中最丰富的蛋白质。HA和NA蛋白是包膜糖蛋白，负责病毒吸附和病毒颗粒侵入细胞，并且是用于病毒中和及保护性免疫的主要免疫显性表位的来源。HA和NA蛋白都被认为是预防性流感疫苗的最重要组分。

每年，季节性流感仅在美国就导致超过300,000例入院和36,000例死亡(Simonsen et al.,Lancet Infect Dis 7:658-66,2007)。2009年新型H1N1流感病毒的出现证明了新的流感大流行可如何快速地横扫全球。H3N2流感毒株可感染鸟类和哺乳动物，并在季节性流感中H3N2流感正在变得越来越丰富。H2N2是之前已经引起人类大流行的另一种流感亚型。H2N2毒株引起了1957年的亚洲大流行。B型流感病毒是另一种流感亚型，该病毒感染人类并代表季节性流感的一个重要病因，但是由于它的受限的宿主范围(人和海豹)，尚未得知其能够引起大流行。

目前在美国有两种获得批准的流感疫苗方法——灭活的裂解疫苗和减毒活病毒疫苗。灭活疫苗可有效地诱导体液免疫应答，但通常只有弱的细胞免疫应答。活病毒疫苗不能给予免疫妥协的或怀孕的患者，因为这些患者具有增加的感染风险。因此，存在对广泛保护性的流感病毒疫苗的需求。

发明内容

本文公开了用于引起针对流感病毒的广泛反应性免疫应答的以计算方式优化的H2N2、H3N2和B型流感HA多肽的产生。基于选择的H2N2、H3N2和B型流感病毒分离株，通过一系列的HA蛋白比对和随后的共有序列产生，开发了所述优化的HA多肽。

本文提供了用于引起针对H2N2、H3N2和B型流感的广泛反应性免疫应答的具有优化的氨基酸序列的重组流感HA多肽。在一些实施方案中，所述HA多肽包含：与SEQ ID NO:1至少99.6％相同、与SEQ ID NO:2至少99.4％相同、与SEQ ID NO:4至少99.7％相同、与SEQ ID NO:5至少99.6％相同、与SEQ ID NO:6至少98.8％相同、与SEQ ID NO:8至少99.7％相同、与SEQ ID NO:9至少98.4％相同、与SEQ ID NO:10至少97.8％相同或与SEQ ID NO:11至少98.9％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽的氨基酸序列包含：与SEQ ID NO:1相比不多于2个氨基酸置换；与SEQ ID NO:2相比不多于3个氨基酸置换；与SEQ ID NO:4相比不多于1个氨基酸置换；与SEQ ID NO:5相比不多于2个氨基酸置换；与SEQ ID NO:6相比不多于7个氨基酸置换；与SEQ ID NO:8相比不多于10个氨基酸置换；与SEQ ID NO:9相比不多于9个氨基酸置换；与SEQ ID NO:10相比不多于10个氨基酸置换；或与SEQ ID NO:11相比不多于6个氨基酸置换。在一些实施方案中，所述流感HA多肽没有N-末端的甲硫氨酸残基。

本公开内容还提供了编码所述重组HA多肽的分离的核酸分子和载体。还提供了包含所述载体的分离的细胞。

还提供了包含本文公开的优化的HA多肽的流感病毒样颗粒(VLP)和融合蛋白。

还提供了包括在可药用载体中的本文公开的优化的流感HA多肽、融合蛋白或VLP的组合物。本公开内容还提供了通过给予所公开的组合物、融合蛋白或VLP在受试者中引起针对流感病毒的免疫应答的方法。

还提供了通过给予受试者包含含有优化的HA多肽的VLP的组合物而使所述受试者对流感病毒免疫的方法。