[发明专利]以计算方式优化的人和禽H5N1流感的广泛反应性抗原

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2012年2月13日提交的美国临时申请No.61/597,998的优先权，所述临时申请以引用的方式全文纳入本文。

技术领域

本公开内容涉及可引起针对人和禽H5N1流感病毒的广泛反应性的免疫应答的优化的流感血凝素蛋白及其作为疫苗的用途。

背景技术

流感病毒是正粘病毒科(Orthomyxoviridae)家族的成员。有三个亚型的流感病毒，命名为A型流感、B型流感和C型流感。所述流感病毒粒体含有分段的负义(negative sense)RNA基因组，所述基因组编码以下蛋白：血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质(M1)、质子离子通道蛋白(M2)、核蛋白(NP)、聚合酶碱性蛋白1(PB1)、聚合酶碱性蛋白2(PB2)、聚合酶酸性蛋白(PA)和非结构蛋白2(NS2)。HA、NA、M1和M2为膜相关蛋白，而NP、PB1、PB2、PA和NS2为核衣壳相关蛋白。M1蛋白是流感颗粒中最丰富的蛋白质。HA和NA蛋白是包膜糖蛋白，负责病毒吸附和病毒颗粒侵入细胞，并且是用于病毒中和及保护性免疫的主要免疫显性表位的来源。HA和NA蛋白都被认为是预防性流感疫苗的最重要组分。

每年，季节性流感仅在美国就导致超过300,000例入院和36,000例死亡(Simonsen et al.,Lancet Infect Dis 7:658-66,2007)。2009年新型H1N1流感病毒的出现证明了新的流感大流行可如何快速地横扫全球。

目前在美国有两种获得批准的流感疫苗方法——灭活的裂解疫苗和减毒活病毒疫苗。灭活疫苗可有效地诱导体液免疫应答，但通常只有弱的细胞免疫应答。活病毒疫苗不能给予免疫妥协的或怀孕的患者，因为这些患者具有增加的感染风险。因此，存在对广泛保护性的流感病毒疫苗的需求。

发明内容

本文公开了用于引起针对H5N1流感病毒的广泛反应性免疫应答的以计算方式优化的H5N1HA多肽的产生。基于1989个人和禽H5N1流感分离株，通过一系列的HA蛋白比对和随后的共有序列产生，开发了所述优化的HA多肽。

本文提供了用于引起针对H5N1流感的广泛反应性免疫应答的具有优化的氨基酸序列的重组流感HA多肽。在一些实施方案中，所述HA多肽包含与SEQ ID NO:1至少99.8％相同或与SEQ ID NO:3至少99.6％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽的氨基酸序列包含：与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3相比不多于2个或不多于1个置换。在一些实施方案中，所述流感HA多肽没有N-末端的甲硫氨酸残基。

本公开内容还提供了编码所述重组HA多肽的分离的核酸分子和载体。在一些实施方案中，编码所述重组HA多肽的核酸分子和载体包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的核苷酸序列。还提供了包含所述载体的分离的细胞。

还提供了包含本文公开的优化的HA多肽的流感病毒样颗粒(VLP)和融合蛋白。

还提供了包括在可药用载体中的本文公开的优化的流感HA多肽、融合蛋白或VLP的组合物。本公开内容还提供了通过给予所公开的组合物、融合蛋白或VLP在受试者中引起针对流感病毒的免疫应答的方法。

还提供了通过给予受试者包含含有优化的HA多肽的VLP的组合物而使所述受试者对流感病毒免疫的方法。

根据以下参照附图进行的详细描述，本发明的上述和其他目的、特征和优点会变得更加清楚。

附图说明

图1的示意图概述了使用1989个人和禽H5N1流感病毒分离株来产生COBRA HA序列的方法，在本文中称为“所有H5COBRA”HA。

图2的示意图概述了使用1213个人和禽H5N1进化枝2分离株来产生COBRA HA序列的方法，在本文中称为“人-禽COBRA-2”HA。

图3的图示出了用含有所有H5COBRA HA序列(SEQ ID NO:1)的VLP、含有人-禽COBRA-2HA序列(SEQ ID NO:3)的VLP、含有人进化枝2流感病毒COBRA HA序列(人COBRA-2)的VLP或含有大天鹅(A/Whooper Swan/Mongolia/244/2005)流感病毒HA的VLP接种小鼠后，针对进化枝1、进化枝2和进化枝7攻击毒株的HAI滴度。在第0周时和第3周时在使用佐剂(Imject^TM)的情况下进行疫苗接种(3μg)。