[发明专利]细胞和其它复杂生物材料的色谱分离

权利要求书

1.一种分离靶细胞的方法，其中所述靶细胞在所述靶细胞表面上具有受体分子，所述方法包括：

-提供样品，所述样品包含所述靶细胞，

-提供受体结合试剂，所述受体结合试剂包含结合位点B和结合配偶体C，

其中，包含在所述受体结合试剂中的结合位点B能够特异性结合到所述靶细胞表面上的受体分子，其中，经由所述结合位点B的受体结合试剂和受体分子之间的结合的离解常数(K_D)具有低亲和性，或其中经由所述结合位点B的受体结合试剂和受体分子之间的结合的离解速率常数(koff)具有约3×10^-5sec^-1或更大的值，其中包含在所述受体结合试剂中的结合配偶体C能够可逆地结合到亲和试剂的结合位点Z，和

-使所述样品在合适的固定相上进行色谱，所述固定相具有固定于其上的所述亲和试剂，

其中所述亲和试剂包含结合位点Z，其中所述结合位点Z与包含在所述受体结合试剂中的结合配偶体C形成可逆的键，且其中所述受体结合试剂的结合位点B结合到所述靶细胞表面上的受体分子，由此使所述靶细胞可逆地固定在所述固定相上。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述亲和试剂包含两个或更多个结合位点Z，所述结合位点Z能够可逆地结合到包含在所述受体结合试剂中的结合配偶体C。

3.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括将竞争试剂负载到所述固定相上，其中，所述竞争试剂能够破坏所述受体结合试剂的结合配偶体C与所述亲和试剂的结合位点Z的结合，由此替换所述受体结合试剂。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述竞争试剂能够竞争性地结合到所述亲和试剂的结合位点Z。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在将包含所述靶细胞的样品施用到所述固定相之前，使所述受体结合试剂固定在所述固定相上。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述样品包含靶细胞和其他细胞的混合物，其中所述其他细胞在其细胞表面上缺乏所述受体分子，且其中所述方法包括从所述其他细胞中分离所述靶细胞。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述受体结合试剂和所述受体分子之间的低亲和力相互作用具有在约10^-3至约10^-7M范围内的K_D。

8.一种分离靶细胞的方法，其中所述靶细胞在所述靶细胞表面上具有受体分子，所述方法包括：

-提供样品，所述样品包含所述靶细胞和受体结合试剂，

所述受体结合试剂包含结合位点B和结合配偶体C，

其中，包含在所述受体结合试剂中的结合位点B能够特异性结合到所述受体分子，且

-使所述样品在合适的固定相上进行色谱，所述固定相为凝胶过滤基质和/或亲和色谱基质，其中所述凝胶过滤基质和/或亲和色谱基质包含亲和试剂，其中所述亲和试剂包含特异性结合到包含在所述受体结合试剂中的结合配偶体C的结合位点Z，由此分离所述靶细胞。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述色谱是柱色谱或平面色谱。

10.根据权利要求8所述的方法，其中使所述样品进行色谱包括允许包含在所述受体结合试剂中的结合配偶体C与与其特异性结合的所述固定相的亲和试剂的结合位点Z形成复合物，由此使所述受体结合试剂固定到所述固定相上。

11.根据权利要求8或10所述的方法，其中包含在所述受体结合试剂中的结合配偶体C能够特异性结合到所述亲和试剂的结合位点Z，其中所述亲和试剂包含两个或更多个能够特异性结合到包含在所述受体结合试剂中的结合配偶体C的结合位点Z。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述亲和色谱基质和/或所述凝胶过滤基质具有共价固定于其上的所述亲和试剂。

13.根据权利要求8至12中任一项所述的方法，其中所述样品进一步包含竞争试剂，其中所述竞争试剂结合到亲和试剂的结合位点Z，所述结合位点Z特异性结合到包含在所述受体结合试剂中的结合配偶体C，由此使所述竞争试剂固定到所述固定相上。