[发明专利]启动子及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及在耐热性酵母中发挥功能的新启动子及其用途。

背景技术

通过利用其发酵能力和作为生产多种物质的宿主，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)所代表的酵母广泛用于食品工业中。此外，酵母是基因工程领域的主要研究主体。作为酵母的例子，其最佳温度范围落在相对高的温度范围内的酵母(也称作耐热性酵母)是熟知的，酿酒酵母也是熟知的。

使用这类耐热性酵母，可以在相对高的温度范围内维持反应体系，使得防止污染成为可能。此外，需要在相对高的温度范围内培养酵母，这取决于待生产的物质的类型或反应体系。在这种情况下，特别优选的是使用耐热性酵母。

此外，通常，在酵母中表达给定的基因时，使用恒定允许高表达的启动子。可以在酵母中使用的已知启动子的例子包括TDH3启动子、ADH1启动子和TEF1启动子。此外，非专利文献1公开了使用TDH3启动子，在耐热性酵母中表达纤维素酶基因。

虽然以上的不同启动子可以总是引起位于其下游的基因在通常可获得的酵母如酿酒酵母中高表达，但是当使用耐热性酵母作为宿主时，这类下游基因的表达水平不足。即，不存在可以引起目的基因在耐热性酵母中高表达的常规已知的启动子。

引文列表

非专利文献

NPL 1：Jiong Hong等人，Journal of Biotechnology 130(2007)114-123

发明概述

技术问题

考虑到以上情况，本发明的目的是提供能够引起目的基因高表达、特别在耐热性酵母中高表达的新启动子。

技术问题的解决方案

作为为了实现以上目的的充分研究结果，发明人成功鉴定到能够引起目的基因在耐热性酵母中高表达的新启动子。这已经导致本发明的完成。本发明包括以下。

(1)启动子，其位于马克斯克鲁维酵母染色体上的PIR1基因上游并且包含控制PIR1基因表达的区域。

(2)启动子，其位于马克斯克鲁维酵母染色体上的CTR1基因上游并且包含控制CTR1基因表达的区域。

(3)根据(1)的启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列由来自SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列的3'末端的至少1000个核苷酸组成。

(4)根据(1)的启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列由来自SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列的3'末端的至少2000个核苷酸组成。

(5)根据(2)的启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列由来自SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的3'末端的至少384个核苷酸组成。

(6)根据(2)的启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列由来自SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的3'末端的至少429个核苷酸组成。

(7)核酸构建体，其包含根据(1)至(6)中任一项的启动子。

(8)表达载体，其包含根据(1)至(6)中任一项的启动子。

(9)根据(8)的表达载体，其还包含位于所述启动子下游的基因。

(10)转化体，其中根据(1)至(6)中任一项的启动子插入目的基因的上游。

(11)根据(10)的转化体，其中目的基因是外来基因。

(12)根据(10)的转化体，其中使用耐热性酵母细胞作为宿主细胞。

(13)根据(10)的转化体，所述转化体能够引起基于纤维素的生物量糖化和乙醇发酵。

(14)用于制备物质的方法，包括培养根据(10)至(13)中任一项的转化体并且在培养后收集培养基和/或转化体中产生的目的物质。

(15)用于制备根据(14)所述的物质的方法，其中目的物质是通过乙醇发酵从糖合成的乙醇，所述糖通过糖化基于纤维素的生物量获得。

有利的发明效果

本发明的启动子可以甚至在耐热性酵母中引起位于其下游的基因高表达。具体而言，对于耐热性酵母，可以使用本发明的启动子增加目的基因的表达水平。