[发明专利]用于诊断阿扎胞苷耐药性的试验

说明书

技术领域

本发明涉及能够体外诊断患者对阿扎胞苷治疗的耐药性的分析方法。本发明还涉及使得能够预测患者对阿扎胞苷治疗的耐药性的体外分析试剂盒以及所述试剂盒的用途。

背景技术

具有上式的阿扎胞苷是目前患有不适于造血干细胞移植的骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓细胞白血病(AML)的患者的唯一被认可的治疗。阿扎胞苷还使用的名称销售用于治疗这些疾病。

阿扎胞苷(AZA)是一种在这两种疾病中产生40％-60％反应的低甲基化剂(hypomethylating agent)。

骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓细胞白血病(AML)是发生于骨髓干细胞的髓系血液病，骨髓干细胞包含相当于白细胞的粒细胞系的前体、相当于红细胞的成红细胞系的前体、相当于血小板的巨核细胞系的前体和组织-单核细胞系的前体。MDS的特征在于粒细胞、红细胞和巨核细胞骨髓细胞系的一种或所有三种的严重成熟障碍(其是引起血细胞减少症的原因)。DMS可发展成为急性白血病(AL)。传统上，诊断以血液和骨髓的细胞学研究、细胞遗传学和分子生物学为基础。DMS包括各种类型的贫血或难治性血细胞减少症以及5q-综合征。

AML的特征在于粒细胞、红细胞和巨核细胞系三种的骨髓前体的快速增殖，导致不成熟细胞在血液和骨髓中蓄积，破坏了正常的血细胞生成。其诊断基于与用于MDS的相同技术。AML包括未分化型AML、极低分化型AML、髓细胞性白血病、单核细胞性白血病、粒-单核细胞性白血病以及急性红细胞性白血病和急性成巨核细胞性白血病。原发性或继发性AML可能是在各种器官或组织(皮肤、神经节、乳腺、消化道、脾等)中形成肿瘤的原因，产生了髓系肉瘤，亦称绿色瘤或粒细胞肉瘤。AML可表现为急性白血病，并且与恶性淋巴瘤一起提出了诊断难题。

用阿扎胞苷治疗的MDS或AML患者对阿扎胞苷有耐药性(“AZA耐药”)或对阿扎胞苷敏感(“AZA敏感”)。然而，甚至“AZA敏感”患者在差不多的一段时间过去后，似乎都遭到全身性复发。

换句话说，即使40％用阿扎胞苷治疗的患者立即有耐药性，且约60％的患者在最初数月对所述治疗敏感，全部患者在短期或中期都将发生对这种治疗的耐药性。这种现象在传统上被称为复发，是指对患者以前对之敏感的治疗产生耐药性。

现行的预后评级系统使得可能预测和预计用低甲基化剂治疗的患者的总体生存。这些系统基于患者亚群中所评价的预后评分。这些是由患者的核型研究和某些临床特征限定的风险群。然而，与这些评级系统有关的结果是不可靠的反应预测因子。

MDS患者中有一半具有正常核型，并且具有相同染色体异常的患者常常在临床上是异质的。体细胞点突变常见于MDS。基因TP53、EZH2、ETV6、RUNX1和ASXL1的突变是MDS患者中总体生存率低的预测因子，其独立于其它已确立的危险因子。

然而，现有系统不提供在不给予患者所述治疗的情况下能够诊断患者对阿扎胞苷的敏感性的合适结果。

目前，用于测定患者是否对阿扎胞苷治疗有耐药性的唯一的已知方法是将所述治疗给予患者至少6个月，并确定所述治疗是否有效果。

使用该相同方法来鉴定患者的复发。实际上，目前已知的鉴定患者复发的唯一方法是确定阿扎胞苷治疗对患者不再有效的时间。不存在在相关症状出现之前能够预测这种复发的时间的方法。

当被建议用于MDS和/或AML患者时，阿扎胞苷治疗是每日皮下注射至上臂、大腿或腹部7天，接着21天的休息期。可能产生多种较严重或不太严重的不良反应，例如颅内出血、败血症、血压变化、嗜睡、全身不适感和脱发。另外，阿扎胞苷治疗的费用相当可观。每年治疗约为80,000欧元。因此目前没有可靠且便宜地诊断患者对阿扎胞苷治疗是敏感还是耐药的方法。

另外，目前需要预测患者对阿扎胞苷治疗的耐药性以避免将阿扎胞苷给予该治疗对其无效的患者，不论是从其给药开始无效，还是在所述患者产生耐药性的数月之后无效。实际上，将这类治疗给予耐药患者是强制性的，对患者可能是有危险的，并且还可产生相当大的不必要的费用。这适用于建议MDS和/或AML患者阿扎胞苷治疗的两种情况，并适用于所有治疗性阿扎胞苷治疗。实际上，阿扎胞苷耐药性与阿扎胞苷分子有关，而非其给予的方式。

更快地鉴定立即产生耐药性的患者以及最初是敏感的患者的复发时间的能力也是有利的，因为它使得可能在所述患者的临床病况恶化之前提供其它的临床试验。

因此能够尽早诊断是必要的，不论患者将对阿扎胞苷治疗敏感，还是能够预测患者的复发时间。