[发明专利]具改变末端的重组腺病毒群

说明书

本发明是关于医学领域及应用于疫苗接种及基因疗法中的基因递送领域。更具体而言，本发明是关于重组腺病毒载体群。

背景技术

重组人类及动物腺病毒广泛用于其于基因疗法及疫苗接种中的应用。腺病毒载体(vector)用作欲引入宿主细胞中的目标基因的载体(carrier)，例如用以表达编码期望抗原的基因或其部分以引发免疫反应。

已鉴别出50种以上不同人类腺病毒血清型。其中，在历史上已最广泛地研究腺病毒血清型5(Ad5)以用作基因载体。最近，鉴于人类群体中抵抗这些血清型的预先存在的中和抗体的含量较低，已研究若干其他血清型(例如人类Ad11、Ad26、Ad34、Ad35、Ad48、Ad49及Ad50)及猿腺病毒作为载体(例如，参见WO 00/70071)。这些载体的有前景的实例是重组Ad35(rAd35)及rAd26，在临床试验中对其进行研究。

已详细研究具有约34-38kb的双链DNA基因组的腺病毒的分子生物学。所有腺病毒的特征均在于不同反转末端重复(ITR)的大小为约100bp(Dan等人，2001,Virus Genes 22:175-179；Liu等人，2003,Curr Top Microbiol Immunol 272:131-164)，其在不同组的血清型中保留(Shinagawa 等人，1987,Gene 55:85-93)。基因组端在基因组的5’端处共价附接至末端蛋白(TP)。ITR具有复制起点(Bernstein等人，1986,Mol Cell Biol 6:2115-2124；Challberg及Rawlins,1984,Proc Natl Acad Sci USA 81:100-104；Guggenheimer等人，1984,Proc Natl Acad Sci USA 81:3069-3073；Harris及Hay，1988,J Mol Biol 201:57-67；Hay,1985,EMBO J 4:421-426；van Bergen等人，1983,Nucleic Acids Res 11:1975-1989；Wang及Pearson，1985,Nucleic Acids Res 13:5173-5187)且对DNA复制至关重要，含有促进复制的细胞蛋白的结合位点并有利于狭长结构形成。ITR序列具有在核苷酸9-18范围内的短的高度保留典型“核心区”(Liu等人，同上)。然而，此核心区之前的末端8个核苷酸在腺病毒类型与分离株之间变化(Alestrom等人，1982,Gene 18:193-197；Dan等人，同上；Jacobs等人，2004,J Gen Virol85:3361-3366；Purkayastha等人，2005,J Clin Microbiol 43:3083-3094；Rademaker等人，2006,J Gen Virol 87:553-562；Shinagawa等人，1987，同上；Shinagawa等人，1983,Virology 125:491-495；Shinagawa及Padmanabhan，1980,Proc Natl Acad Sci USA 77:3831-3835；Tokunaga等人，1982,Gene 18:329-334；Houng等人，2006,J Clin Virol 35:381-387)。尽管大多数腺病毒在末端8个核苷酸中展示CATCATCA序列，但已阐述若干可替代的序列。

鉴于多种似乎适于使用这些基因转移运载体治疗或预防的疾病以及大量人受这些疾病影响且世界范围内人群不断增长，对重组腺病毒的需求大幅提高。

对于意欲投与人类的临床群而言，重组腺病毒(rAd)的大规模生产必须安全且有效，且符合优良制造规范(GMP)指南。此方面中重要的一个方面是这些所产生的rAd群的同源性。

现在本文中惊人地报导，在某些rAd的基因组5’端上的8个最末端碱基的序列中发现变化，从而产生关于这些序列展示异源性的群。

因此，业内仍需要大规模提供rAd群，这些群展示改良的同源性。本发明提供这些群以及其获得方法。另外，本发明的群中的rAd在生产过程中展示改良的复制。

发明概述

本发明提供包含多个重组腺病毒颗粒的组合物，其中重组腺病毒是血清型5、11a、26、34、35、48、49或50的重组人类腺病毒、或重组猿腺病毒，该组合物的特征在于该组合物中的基本上所有腺病毒颗粒的基因组皆包含核苷酸序列CTATCTAT作为5’末端核苷酸。