[发明专利]通过新一代测序进行基因分型在审
申请号: | 201380013610.9 | 申请日: | 2013-01-11 |
公开(公告)号: | CN104334739A | 公开(公告)日: | 2015-02-04 |
发明(设计)人: | 帕特里克·S·施纳布尔;刘三震;吴薇 | 申请(专利权)人: | DATA生物有限公司 |
主分类号: | C12P19/34 | 分类号: | C12P19/34 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人: | 杜艳玲;梁谋 |
地址: | 美国衣*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 通过 新一代 进行 基因 | ||
1.一种通过测序进行基因分型的方法,所述方法包括:
1)用限制性内切酶消化核酸以产生片段;
2)将单链条形码寡核苷酸连接至所述片段以产生模板;
3)将所述模板扩增以产生扩增子;以及
4)对所述扩增子测序以产生序列读段。
2.如权利要求1所述的方法,其中通过混合多个模板来产生模板池。
3.如权利要求1所述的方法,其中通过混合来自多名个体的多个模板来产生模板池。
4.如权利要求1所述的方法,其进一步包括解析所述序列读段,定位所述序列读段,以及指定基因型。
5.如权利要求1所述的方法,其中用两种不同的限制性内切酶消化所述核酸。
6.如权利要求1所述的方法,其中用NspI和BfuCI消化所述核酸。
7.如权利要求1所述的方法,其中所述单链条形码寡核苷酸鉴定作为所述核酸的来源的受试者。
8.如权利要求1所述的方法,其中所述扩增包括使用靶标特异性引物。
9.如权利要求1所述的方法,其中所述扩增选择扩增子用于测序。
10.一种通过测序进行基因分型的方法,所述方法包括:
1)提供来自第一受试者的第一组多个核酸;
2)提供来自第二受试者的第二组多个核酸;
3)用限制性内切酶消化所述第一组多个核酸以产生第一组多个片段;
4)用所述限制性内切酶消化所述第二组多个核酸以产生第二组多个片段;
5)将第一单链条形码寡核苷酸连接至所述第一组多个片段的每个片段以产生第一组多个模板;
6)将第二单链条形码寡核苷酸连接至所述第二组多个片段的每个片段以产生第二组多个模板;
7)将所述第一组多个模板与所述第二组多个模板混合以产生模板池;
8)使用靶标特异性引物扩增所述模板池的子集以产生多个扩增子;以及
9)对所述多个扩增子测序以产生多个序列读段;
10)使用所述第一条形码寡核苷酸的第一序列和所述第二条形码寡核苷酸的第二序列对所述序列读段进行解卷积。
11.一种组合物,其包含单链条形码寡核苷酸,其中所述单链条形码寡核苷酸包含选自由SEQ ID NO:1-23组成的群组的序列。
12.如权利要求11所述的组合物,其进一步包含第二单链寡核苷酸。
13.一种组合物,其包含核酸,其中所述核酸序列包含单链条形码寡核苷酸的序列、靶标位点的序列,和第二单链寡核苷酸的序列。
14.如权利要求13所述的组合物,其进一步包含与所述单链条形码寡核苷酸互补的第一扩增引物和与所述第二单链寡核苷酸互补的靶标特异性扩增引物。
15.根据权利要求11-14所述的组合物的用途,其用于对一种或多种受试者进行基因分型。
16.一种试剂盒,其包含根据权利要求11-14所述的组合物。
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