[发明专利]非对称发夹靶标捕获低聚物

权利要求书

1.一种捕获靶核酸的方法，所述方法包括：

使被怀疑包含所述靶核酸的样品与靶标捕获低聚物和固定化探针接触；

所述靶标捕获低聚物包含第一和第二发夹茎片段，所述第一发夹茎为至少15个核碱基单元且所述第二发夹茎为至少五个核碱基单元，所述第一和第二发夹茎片段的长度差异为与靶核酸互补的靶标结合片段侧面的至少五个核碱基单元，所述靶标捕获低聚物采取发夹茎-环的形式，所述茎通过所述第一和第二发夹茎片段的分子内杂交形成，并且所述靶标结合片段构成所述环；

所述固定化探针包含具有探针的载体，所述探针包含与所述第一或第二发夹茎片段互补的片段；

其中如果所述样品包含所述靶核酸，则所述靶核酸杂交至所述靶标结合片段，打断所述第一和第二发夹茎片段的所述分子内杂交，使得所述第一或第二发夹片段杂交至所述固定化探针上的所述互补片段，形成载体结合的捕获杂交体；并且如果所述样品不包含所述靶核酸，则所述第一和第二片段保持以茎进行分子内杂交。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标存在于所述样品中。

3.根据权利要求1所述的方法，还包括从所述样品分离所述载体结合的捕获杂交体。

4.根据权利要求2所述的方法，还包括从所述样品分离所述载体结合的捕获杂交体。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述接触在第一温度下，然后是低于所述第一温度的第二温度下进行，其中所述第一温度在所述第一和第二茎片段之间形成的双链以及所述靶标结合片段和所述靶核酸之间形成的双链的所述解链温度之间，并且所述第二温度低于所述第一和第二茎片段形成的所述双链以及所述第二茎片段和所述固定化探针之间形成的双链的所述解链温度。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述分离在所述第二温度下进行。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，还包括从所述捕获杂交体释放所述靶核酸。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，还包括检测所述靶核酸。

9.根据权利要求8所述的方法，还包括对所述靶核酸测序。

10.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述靶标捕获低聚物是具有与不同的靶标互补的不同靶标结合片段的多个靶标捕获低聚物中的一者。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述多个靶标捕获低聚物包含至少十个靶标捕获低聚物。

12.一种包含第一和第二茎片段的靶标捕获低聚物，所述第一茎片段为至少15个核碱基单元且所述第二茎片段为至少五个核碱基单元，所述第一和第二茎片段的长度差异为与靶核酸互补的靶标结合片段侧面的至少五个核碱基，其中在杂交条件下：

在不存在所述靶核酸情况下，所述靶标捕获低聚物形成茎-环，所述第一和第二茎片段的分子内杂交形成所述茎，并且所述靶标结合片段形成所述环；以及

在存在所述靶核酸的情况下，所述靶标结合片段杂交至所述靶核酸，打断所述第一和第二茎片段的所述分子内杂交，产生能够杂交至互补的固定化探针的所述第一茎片段。

13.根据权利要求12所述的靶标捕获低聚物，其中所述第二茎片段的长度为所述第一茎片段长度的39-61％。

14.根据权利要求12所述的靶标捕获低聚物，其中所述第一和第二茎片段的长度差异为至少9个核碱基单元。

15.根据权利要求12所述的靶标捕获低聚物，其中所述第一和第二茎片段的长度差异为5-15个核碱基单元。