[发明专利]用于通过核酸聚合酶对衬底多核苷酸进行大小受控的同聚物加尾的方法和组合物

权利要求书

1.一种试剂盒，其包含：

模板非依赖性核酸聚合酶；

衰减子多核苷酸，其包含衰减子序列和定位在所述衰减子序列附近的序列W，其中所述衰减子序列的长度为10至100个核苷酸，其中所述衰减子多核苷酸包含选自至少一个核糖核苷酸、至少一个脱氧核苷酸、C3间隔区、磷酸、双脱氧核苷酸、氨基以及反向脱氧胸苷的3'封闭基团；

衔接子多核苷酸，其中所述衔接子多核苷酸包含与所述衰减子多核苷酸的序列W互补的序列X；

与衰减子序列互补的核苷酸；以及

连接酶，

其中所述衰减子多核苷酸控制通过模板非依赖性核酸聚合酶添加至衬底多核苷酸的核苷酸尾部，以及其中所述衔接子多核苷酸与序列W杂交并被连接至衬底多核苷酸的所述核苷酸尾部。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述模板非依赖性核酸聚合酶为末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述模板非依赖性核酸聚合酶为RNA特异性核苷酸转移酶，其选自由聚(A)聚合酶和聚(U)聚合酶组成的组。

4.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述衰减子序列包含10个核苷酸。

5.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述衰减子序列包含20个核苷酸。

6.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述衰减子序列包含30个核苷酸。

7.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述衰减子序列包含50个核苷酸。

8.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述衰减子序列包含100个核苷酸。

9.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述衰减子多核苷酸是能降解的或能被替代的。

10.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述衔接子多核苷酸包含5'磷酸。

11.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述连接酶是DNA连接酶或RNA连接酶。

12.如权利要求11所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包含引物、聚合酶和第二衔接子多核苷酸，所述第二衔接子多核苷酸包含序列Y和序列V，其中当序列V具有与序列Y相同的长度时，序列V与序列Y互补，或者其中当序列V的长度小于序列Y的长度时，序列V与序列Y的部分互补，所述第二衔接子多核苷酸是与所述衰减子多核苷酸分开的分子。

13.如权利要求10所述的试剂盒，其中所述衰减子多核苷酸包含用于固定的亲和标记。

14.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中所述衰减子多核苷酸的衰减子序列包含(1)选自由聚(dA)、聚(dT)、聚(dC)、聚(dG)、聚(dU)、聚(rA)、聚(U)、聚(rC)、聚(rG)组成的组的同聚序列或者(2)包含以下组合的杂聚序列：

(i)dA与rA碱基、

(ii)dT、dU与U碱基、

(iii)dC与rC碱基，或

(iv)dG与rG碱基，

或者所述衰减子序列包含二核苷酸序列，所述二核苷酸序列包含多个随机序列，所述随机序列包含以下二核苷酸组合：(i)dG和dC；(ii)dA和dT；(iii)dG和dT；(iv)dG和dA；(v)dA和dC；或(vi)dC和dT，

或者所述衰减子分子包含二核苷酸序列，所述二核苷酸序列包含核糖核苷酸与脱氧核糖核酸的混合物。