[发明专利]表达狂犬病病毒和OX40蛋白的重组痘病毒载体及从其制造的疫苗

说明书

其它申请的交叉参考

本申请要求2012年2月14日提交的美国临时专利申请61/598,610的优先权，将所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。

发明领域

本发明总地来说涉及病毒疫苗和使用所述疫苗的方法。更具体地，本发明涉及病毒载体，所述病毒载体可包含一种或多种基因佐剂，从而导致对由载体(有利地病毒载体)中的基因所表达的抗原的增强的免疫反应。

背景

狂犬病是可在所有温血动物物种中发生并且由狂犬病病毒引起的疾病。在几乎所有情况下狂犬病病毒感染后临床特征的爆发导致感染物种的死亡。狂犬病病毒是弹状病毒科的非分段型负链RNA病毒。狂犬病病毒病毒体由两个主要结构组分组成：核衣壳或核糖核蛋白(RNP)和以围绕RNP核心的双层膜形式存在的包膜。所有弹状病毒的感染性组分是RNP核心，其由与两个次要蛋白质即RNA依赖性RNA聚合酶(L)和磷蛋白(P)组合的核衣壳(N)蛋白包裹的RNA基因组组成。围绕RNP核心的膜由两种蛋白质：跨膜糖蛋白(G)和位于膜的内部位置的基质(M)蛋白组成。

也称为突起蛋白(spike protein)的G蛋白负责狂犬病病毒的细胞粘附和膜融合，并且还是宿主免疫系统的主要靶。已鉴定G蛋白的位置330至340上的氨基酸区域(称为抗原性位点III)负责该病毒的毒力，特别地位置333上的Arg残基。所有狂犬病病毒株都具有该毒力决定抗原位点III。

用于伴侣动物的常规狂犬病疫苗包含灭活的狂犬病病毒+佐剂，其在本领域是公知的，并且在性质上是多样的。佐剂可以例如包括不溶于水的无机盐、脂质体、胶束或乳剂，即弗氏佐剂。其它佐剂可见于Vogel和Powell,1995，上文中提及的。尽管不存在单一的佐剂作用机制，但基本特征是相比于由单独的疫苗抗原诱发的反应而言它们有显著增强对疫苗抗原的免疫反应的能力(Nossal,1999,同上；Vogel和Powell,1995,同上)。在这一点上，一些佐剂在增强体液免疫反应上更有效；其它佐剂在增强细胞介导的免疫反应上更有效(Vogel和Powell,1995,同上)；还有另一组的佐剂增强抗疫苗抗原的体液免疫反应和细胞介导的免疫反应二者(Vogel和Powell,1995,同上)。总之，佐剂通常似以5种方式中的至少一种方式发挥它们的作用：1)促进抗原在淋巴结中的摄取、运输和呈递，2)延长抗原呈递，3)先天免疫细胞上表达的信号病原体识别受体(signal pathogen-recognition receptors)(PRR)，4)对细胞引起损伤或应激，这为免疫反应发出信号，和5)诱导优先的Th1或Th2反应(Schijns VE等人2007)。抗原的免疫原性还可通过使用基因佐剂例如存在于免疫细胞膜上的受体的配体来增强。DNA疫苗的基因佐剂已进行了综述(参见，例如，Calarota&Weiner,Expert Rev Vaccines.2004Aug；3(4Suppl):S135-49,Calarota&Weiner,Immunol Rev.2004Jun；199:84-99and Kutzler&Weiner,J Clin Invest.2004Nov；l14(9):1241-4)，然而病毒疫苗(特别地基于痘病毒的病毒疫苗)的基因佐剂仍未获得详尽研究。