[发明专利]具有内切葡聚糖酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸

说明书

涉及序列表

本申请包含计算机可读形式的序列表，其通过提及并入本文。

涉及生物材料的保藏物

本申请含有生物材料保藏物的提及，该保藏物通过提及并入本文。

发明背景

技术领域

本发明涉及具有内切葡聚糖酶活性的多肽，催化域，和内切葡聚糖酶结合域，和编码所述多肽，催化域，和内切葡聚糖酶结合域的多核苷酸。本发明亦涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用所述多肽，催化域，和内切葡聚糖酶结合域的方法。

背景技术

纤维素是简单糖葡萄糖通过β-1,4-键共价连接的聚合物。许多微生物产生水解β-连接的葡聚糖的酶，诸如纤维素酶。纤维素酶包括内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。内切葡聚糖酶在随机位置消化纤维素聚合物，使其暴露于纤维二糖水解酶攻击(attack)。纤维二糖水解酶从纤维素聚合物的末端顺序地释放纤维二糖的分子。纤维二糖是水溶性的β-1,4-连接的葡萄糖二聚体。β-葡糖苷酶将纤维二糖水解成葡萄糖。

纤维素酶有一大批工业应用。在纺织品产业中，纤维素酶在劳动布修整中用于在生物打磨(biostoning)工艺中在劳动布衣服中产生流行的砂洗外观。纤维素酶还用于例如清洁细毛，并且防止棉衣表面上形成小球。

WO9629397公开了具有内切葡聚糖酶活性的来自拟刺盘抱周刺座霉(Volutella colletotrichoides)的多肽。

本发明提供了具有内切葡聚糖酶活性的多肽及编码该多肽的多核苷酸。

发明概述

本发明涉及具有内切葡聚糖酶活性的分离的多肽，其选自下组：

(a)多肽，其与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少80％序列同一性；

(b)多肽，其由多核苷酸编码，该多核苷酸在中等，中等-高，高、或非常高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列，(ii)其cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补物；

(c)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1或其cDNA序列的成熟多肽编码序列具有至少80％序列同一性；

(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如几个)位置包含取代、缺失和/或插入；和

(e)(a)，(b)，(c)，或(d)的多肽的片段，其具有内切葡聚糖酶活性。

本发明还涉及包含催化域的分离的多肽，所述催化域选自下组：

(a)催化域，其与SEQ ID NO:2的氨基酸17至232具有至少80％序列同一性；

(b)催化域，其由多核苷酸编码，该多核苷酸在中等，中等-高、高、或非常高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO:1的核苷酸49至953，(ii)其cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补物；

(c)催化域，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1或其cDNA序列的核苷酸49至953具有至少80％序列同一性；

(d)SEQ ID NO:2的氨基酸17至232的变体，其在一个或多个(例如几个)位置包含取代、缺失和/或插入；和

(e)(a)，(b)，(c)，或(d)的催化域的片段，其具有内切葡聚糖酶活性。

本发明还涉及包含纤维素结合域的分离的多肽，所述结合域选自下组：

(a)纤维素结合域，其与SEQ ID NO:2的氨基酸267至305具有至少80％序列同一性；

(b)纤维素结合域，其由多核苷酸编码，该多核苷酸在中等，中等-高、高、或非常高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO:1的核苷酸1056至1172，(ii)其cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补物；

(c)纤维素结合域，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1或其cDNA序列的核苷酸1056至1172具有至少80％序列同一性；

(d)SEQ ID NO:2的氨基酸267至305的变体，其在一个或多个(例如几个)位置包含取代、缺失和/或插入；和

(e)(a)，(b)，(c)，或(d)的纤维素结合域的片段，其具有结合活性。

本发明还涉及编码本发明多肽的分离的多核苷酸；包含该多核苷酸的核酸构建体；重组表达载体；重组宿主细胞；和生成多肽的方法。