[发明专利]产生PHA的基因工程微生物

权利要求书

1.一种天然产生PHA的微生物的基因工程形式，其与具有编码聚羟基烷羧酸酯(PHA)合成酶的至少一个基因的野生型微生物相比具有增加的拷贝数，其中所述增加的拷贝数提供所述PHA合成酶的均衡性过量产生，并且其中所述基因工程使所述微生物在24小时后与所述野生型相比以至少1.2倍的量来过量产生中链长度的PHA或长链长度的PHA，其中用于评估所述过量产生的参考条件为含有15mM辛酸钠的经修改的MM培养基。

2.权利要求1中所述的基因工程微生物，其中所述基因编码PhaC2合成酶或其同系物。

3.权利要求1或2中所述的基因工程微生物，其中所述PHA合成酶的表达由启动子系统调节，所述启动子系统优选为基于蛋白质的，更优选为T7聚合酶/T7聚合酶启动子系统。

4.权利要求1至3中任一项所述的基因工程微生物，其还在编码所述微生物中的PHA降解中涉及的蛋白质的至少一个基因中具有至少一个修饰，其中所述修饰使编码所述PHA降解中涉及的蛋白质的基因完全或部分失活，更优选地使所述基因完全失活。

5.权利要求4中所述的基因工程微生物，其中所述PHA降解中涉及的蛋白质是PHA解聚酶，优选地是phaZ和其同系物。

6.权利要求1至5中任一项所述的基因工程微生物，其中所述基因修饰在经繁殖和/或培养的所述微生物中被维持，优选地在不存在或存在抗生素的两种情况下均被维持。

7.前述权利要求中任一项所述的基因工程微生物，其中所述基因工程使所述微生物在24小时后与野生型相比优选地以至少1.5倍的量、更优选以至少2倍的量来过量产生中链聚羟基烷羧酸酯PHA，其中用于评估所述过量产生的参考条件为含有15mM辛酸钠的经修改的MM培养基。

8.前述权利要求中任一项所述的基因工程微生物，其中所述微生物选自恶臭假单胞菌、绿脓假单胞杆菌、丁香假单胞杆菌、荧光假单胞杆菌、嗜酸假单胞菌、Pseudomonas olevarans、热液海源菌、泊库岛食烷菌、不动杆菌属、新月柄杆菌、真养产碱菌属、肥大产碱杆菌、棕色固氮菌、富养红球菌、青紫色素杆菌或酒色着色菌，优选为恶臭假单胞菌菌株，更优选为恶臭假单胞杆菌U。

9.前述权利要求中任一项所述的基因工程微生物，其中所述微生物能够在没有添加诱导物分子的情况下产生PHA。

10.前述权利要求中任一项所述的基因工程微生物，其中所述微生物能够产生为单个细胞内颗粒形式的PHA。

11.前述权利要求中任一项所述的基因工程微生物，其中所述微生物在暴露于含有辛酸钠的经修改的MM培养基24小时后能够生产最大的PHA含量，并且优选地也能够将在所述最大的PHA含量±20重量％范围内的PHA含量维持至少48小时的时间。

12.一种用于产生PHA的方法，其包括以下步骤：

a.培养权利要求1至11中任一项所述的微生物；和

b.从培养基中回收PHA。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述方法不涉及或不需要添加用以引发所述微生物中的PHA过量产生和/或PHA合成酶过量产生的诱导物分子，和/或不涉及或不需要添加用以防止丢失基因修饰的抗生素。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述PHA是利用具有3至8个碳原子的酮、优选丙酮在60℃或更低的温度下、优选地在20℃至40℃的温度下通过提取来回收的。

15.权利要求1至11中任一项所述的基因工程微生物用于过量产生中链长度PHA和/或长链长度PHA的用途。