[发明专利]XTEN缀合组合物和制造其的方法

权利要求书

1.一种产生包含XTEN序列的基本上同质的群体的组合物的方法，所述方法包括：

a.提供包含至少一个具有选自表6中所阐述的序列的组的氨基酸序列的多肽的多肽组合物，其中所述氨基酸序列包含至少一个裂解序列，

b.在有效地使所述裂解序列裂解的条件下用胰蛋白酶处理所述多肽组合物；并且

其中所得到的XTEN序列的基本上同质的群体中至少95％、96％、97％、98％或99％的个别序列具有相同的序列长度。

2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括：

a.在有效地捕获所述XTEN序列而不是所述蛋白酶的条件下使所述XTEN序列吸附到色谱底物上；

b.洗脱所述XTEN序列；以及

c.回收所述XTEN序列，其中所述群体的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的个别分子具有相同的序列长度。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述色谱底物是阴离子交换底物。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述阴离子交换底物选自由macrocap Q、capto Q、superQ-650M和poros D组成的组。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述XTEN序列与选自表6中所阐述的氨基酸序列的组的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述XTEN序列与选自表2或3中所阐述的氨基酸序列的组的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。

7.一种组合物，其是通过如权利要求1至6中任一项所述的方法来产生。

8.一种组合物，其包含多肽的基本上同质的群体，所述多肽包含延伸重组多肽(XTEN)，并且其中所述群体中至少90％、91％、92％、93％、94％或95％的个别多肽分子具有相同的序列长度。

9.如权利要求8所述的组合物，其中所述XTEN的特征在于：

a.所述XTEN包含约36个至约3000个氨基酸残基；

b.甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)和脯氨酸(P)残基的总和占所述XTEN的总氨基酸残基的约90％以上；

c.所述XTEN序列是基本上非重复的，以使得(i)所述XTEN序列不含有相同的三个连续氨基酸，除非所述氨基酸是丝氨酸，(ii)至少约80％的所述XTEN序列由非重叠的序列基序组成，所述序列基序中的每一者包含约9个至约14个氨基酸残基，其中任何两个连续氨基酸残基在所述序列基序中的每一者中不会出现两次以上；或(iii)所述XTEN序列具有小于10的子序列计分；

d.如通过GOR算法所测定，所述XTEN序列具有大于90％的无规卷曲形成率；

e.如通过Chou-Fasman算法所测定，所述XTEN序列具有小于2％的α螺旋和2％的β折叠；以及

f.当通过TEPITOPE算法进行分析时，所述XTEN序列缺乏预测的T细胞表位，其中对于所述XTEN序列内的表位的所述TEPITOPE算法预测是基于-9的计分。

10.如权利要求8所述的组合物，其中所述XTEN包含与选自由表2、表3、表4和表22-25中所阐述的序列组成的组的序列具有至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％、或100％的序列同一性的序列。

11.如权利要求8所述的组合物，其进一步包含第一亲和标签。

12.如权利要求11所述的组合物，其中所述第一亲和标签对选自由疏水相互作用色谱(HIC)底物、阳离子交换底物、阴离子交换底物、固定化金属离子亲和色谱(IMAC)底物和固定化抗体底物组成的组的色谱底物具有结合亲和力。

13.如权利要求11所述的组合物，其中所述第一亲和标签选自由表7中所阐述的序列组成的组。

14.如权利要求11至13中任一项所述的组合物，其进一步包含辅助序列。