[发明专利]提取和储存核酸的方法和组合物

说明书

发明领域

本公开总体上涉及用于以干燥形式从生物样品环境提取、稳定和保存核酸的固体组合物。本公开也描述从固体组合物提取、收集、保存和回收核酸的方法。

发明背景

由于化学自水解和酶介导的降解两者，RNA是最不稳定的生物分子之一。因此，提取和保存从生物样品得到的RNA易受多种环境因素影响，包括但不限于用于提取或收集RNA的缓冲剂、pH、温度，特别是强力(robust)核糖核酸酶(RNases)的普遍存在。因此，纯化和未纯化状态的RNA一般都需要在-80℃储存，以防止水解和酶降解，并保持RNA样品的完整性。为了避免与-80℃冷冻相关的成本和空间要求，在环境条件下提取、收集和保存RNA的能力在经济上合乎需要。

目前在环境条件下以液态保存RNA的方法集中在RNA酶(RNases)的失活，例如，通过使用去污剂、离液化合物(chaotropic compound)、还原剂、过渡金属、有机溶剂、螯合剂、蛋白酶、RNA酶肽抑制剂和抗RNA酶抗体。另外的努力已集中在使RNA化学修饰，以防止酯交换和自水解。但很多市售RNA保存产品仅可在室温保存RNA数天或数星期。声称以干燥形式成功收集和保存RNA的目前技术一般需要在储存RNA之前首先使RNA从生物材料(例如，生物样品，如血液、血清、组织、唾液等)“预纯化”并浓缩。

以干燥形式保存RNA的目前技术还需要另外的干燥设备。因此，这些方法无助于在不进行显著样品处理的情况下从样品(例如，生物样品)直接收集RNA。

因此，本领域期需且需要将从样品(例如，生物样品)提取、稳定和储存/保存RNA整合在单一过程内的组合物和方法。这些组合物和方法允许在环境条件下长期储存RNA，并允许回收完整的RNA用于进一步分析。

发明内容

描述了从样品(例如，下文限定的生物样品)提取和储存核酸的固体基质，其中包含蛋白变性剂、还原剂和缓冲剂的组合物在固体基质中以干燥形式存在。本申请的固体基质允许在环境条件下以干燥形式长期储存RNA和DNA。可使以干燥形式包含核酸(例如，RNA)的固体基质经过一个过程，从而以适用于进一步分析所收集的核酸样品的完整形式从固体基质释放核酸。也提供了用本发明的固体基质从生物样品提取和储存核酸的方法。

附图简述

在参考附图阅读以下详述时，化学改性的多孔薄膜的这些和其他特征、方面和优点将变得更好理解，其中在全部附图中相同的符号代表相同的元件，其中：

图1提供在将培养的人细胞点样到不同组成的固体基质后用电洗脱从纤维素回收的核酸的代表性电泳图。指出了高分子量基因组DNA和28s/18s rRNA带。还提供了用Image J.的DNA和RNA的定量。在A组中从各泳道的顶部到底部划垂直线，并且用标绘分布函数(Plot Profile function)，将像素强度(灰度值任意单位)作为线距离(cm)的函数作图。在框中显示相当于基因组DNA和28s/18s rRNA的峰。另外的试验细节阐明于以下实施例部分。

图2提供各描述的组合物的28s和18s rRNA的凝胶像素强度，显示为灰度值任意单位。分析前，纤维素样品在干燥箱中在室温储存10天。28s与18s rRNA之比在图上的各条上阐明。另外的试验细节阐明于以下实施例部分。

图3提供各描述的组合物的28s和18s rRNA的凝胶像素强度。分析前，纤维素样品在干燥箱中在室温储存13天。各试验条件的28s与18s rRNA之比在图上的各条上显现。另外的试验细节阐明于以下实施例部分。

图4提供各描述的组合物的28s和18s rRNA的凝胶像素强度。分析前，纤维素样品在干燥箱中在室温储存10天。各试验条件的28s与18s rRNA之比在图上的各条上显现。另外的试验细节阐明于以下实施例部分。

图5提供所示各组合物的28s和18s rRNA条带的凝胶像素强度。分析前，纤维素样品在干燥箱中在室温储存30天。各试验条件的28s与18s rRNA之比在图上的各条上显现。另外的试验细节阐明于以下实施例部分。

图6提供对于所列各条件从纤维素纸上的经干燥血斑(blood spot)检测的RNA完整性计数(RIN)，这用RNA 6000 Pico LabChips在Agilent 2100 Bioanalyzer生物分析仪上测定。另外的试验细节阐明于以下实施例部分。