[发明专利]PCV/猪肺炎支原体/PRRS组合疫苗

说明书

本发明提供三价免疫原性组合物，其包含猪肺炎支原体(M.hyo)全细胞制备物的可溶性部分；猪圆环病毒2型(PCV2)抗原；和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒抗原，其中M.hyo制备物的可溶性部分基本上不含(i)IgG和(ii)由抗原与免疫球蛋白结合形成的免疫复合物。

发明领域

本发明涉及猪圆环病毒、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae(M.hyopneumoniae或M.hyo))和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒。更具体地，本发明涉及三价免疫原性组合物，其包含M.hyo全细胞制备物的可溶性部分、PCV2抗原和PRRS病毒抗原，以及所述组合物在用于保护猪抵抗地方性动物病肺炎和断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的疫苗中的应用。

发明背景

猪中的地方性动物病肺炎，也被称为支原体肺炎，是由M.hyo引起的。该疾病是一种慢性的、非致命性的疾病，影响各种年龄的猪。受感染的猪仅仅表现出咳嗽和发烧的轻微症状，但是这种疾病对经济有重要的影响，因为饲料转化效率降低并且体重增长减少。地方性动物病肺炎由受感染猪的肺排出的空气传播微生物通过鼻道在猪之间传播。M.hyo的初次感染可能跟随着其它支原体物种(猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)和絮状支原体(Mycoplasma flocculare))以及其它细菌病原体的继发感染。

M.hyo是小的原核微生物，能够自由生活地存在，虽然它经常被发现与真核细胞相联系，因为它对外源甾醇和脂肪酸有绝对需求。这些需求通常需要在含血清的培养基中生长。M.hyo由细胞膜而不是细胞壁包被。

支原体和宿主细胞表面的物理结合是地方性动物病肺炎发生和持续存在的基础。M.hyo感染猪的呼吸道，在气管、支气管、细支气管建群。支原体产生纤毛停滞因子，其导致呼吸道内侧的纤毛停止运动。最终纤毛退化，使猪易于受到次级病原体的感染。在感染动物中观察到紫色到灰色的实变区域的典型病灶。对屠宰动物的调查揭示在30-80％的猪中存在病灶。来自13个州的37个畜群的结果表明99％的畜群有符合地方性动物病肺炎典型特征的肺炎病灶。因此，对有效预防和治疗措施的需求很大。

抗生素如硫姆林、甲氧苄氨嘧啶、四环素和林可霉素有一些益处，但是价格昂贵并且需要长期使用。此外，抗生素尚未被证明有效消除M.hyo的传播或二次感染。通过维持无病原体畜群来预防有时是可行的，但是经常发生M.hyo的再次引入。由于猪肺炎的严重的经济后果，已经在寻找针对M.hyo的疫苗。含有在含血清培养基中生长的支原体生物体制备物的疫苗已进入市场，但是引起了对于免疫物质中存在的血清组分(例如免疫复合物或非免疫原性特异性蛋白)诱导的副反应的关注。提供M.hyo疫苗的其它尝试已有成功者，但是这种疾病仍然广泛流行。

M.hyo和猪圆环病毒2型(PCV2)是猪产业中遇到的两种最为普遍的病原体。被PCV2感染的猪表现出通常被称为断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的综合征。PMWS的临床特征是衰弱、皮肤苍白、瘦弱、呼吸窘迫、腹泻、黄疸(icterus)和黄疸(jaundice)。除了PMWS之外，PCV2与几种其它的感染包括假狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、格雷舍氏病(Glasser’s disease)、链球菌脑膜炎、沙门氏菌病、断奶后大肠杆菌病、饮食肝病和化脓性支气管肺炎相关。M.hyo与地方性动物病肺炎相关，而且已被显示是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的发生中的主要辅因子。

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)由动脉炎病毒引起，该病毒与巨噬细胞，特别是存在于肺中的巨噬细胞(肺泡巨噬细胞)有特别的亲和力。这些巨噬细胞摄取并除去入侵的细菌和病毒，但在PRRS病毒(PRRSV)的情况中并非如此。在PRRS病毒的情况中，它在巨噬细胞内部繁殖，产生更多的病毒并杀死巨噬细胞。一旦PRRSV进入畜群，它便会无限期地存在并有活性。高达40％的巨噬细胞被破坏，这使得细菌和其它病毒增殖并进行破坏。这种事件的一个常见的实例是在幼年/老年团体(grower/finisher units)中，当它们受到PRRS病毒感染时，地方性动物病肺炎的严重程度显著增加。超过一半的断奶期PRRS病毒阴性的猪在进入市场之前被感染。