[发明专利]制备生理活性多肽复合物的改进方法

权利要求书

1.制备生理活性多肽-非肽基聚合物-免疫球蛋白恒定区复合物的方法，其包括：

(1)使具有两个或更多个醛作为官能团的非肽基聚合物与生理活性多肽或免疫球蛋白恒定区的其中之一在浓度为1-20mM的还原剂的存在下反应；和

(2)使步骤(1)的反应混合物与生理活性多肽或免疫球蛋白恒定区中的另一个在浓度为1-100mM的还原剂的存在下反应。

2.权利要求1所述的方法，进一步包括：在步骤(1)之后，从所述反应混合物中分离出生理活性多肽-非肽基聚合物的结合物或免疫球蛋白恒定区-非肽基聚合物的结合物。

3.权利要求1所述的方法，其中所述还原剂的作用是还原在所述非肽基聚合物的所述醛基与所述生理活性多肽或所述免疫球蛋白恒定区的胺基之间结合所产生的可逆性亚胺双键以形成共价键。

4.权利要求1所述的方法，其中所述还原剂选自氰基硼氢化钠、硼烷吡啶复合物、硼氢化钠、硼烷二甲基胺复合物、硼烷三甲基胺复合物和三乙酰氧基硼氢化钠。

5.权利要求1所述的方法，其中在步骤(2)中，所述还原剂的使用浓度为1至40mM。

6.权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中的所述反应进行1至16小时。

7.权利要求1所述的方法，其中步骤(2)中的所述反应进行1至48小时。

8.权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中的所述反应在0至25℃的温度下进行。

9.权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中的所述反应在0至25℃下，在浓度为1至20mM的所述还原剂的存在下进行1至16小时，并且步骤(2)中的所述反应在浓度为1至40mM的所述还原剂的存在下进行1至48小时。

10.权利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物通过其两个或更多个醛官能团共价连接至所述生理活性多肽和所述免疫球蛋白恒定区的每一个。

11.权利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物的所述官能团连接至所述生理活性多肽和所述免疫球蛋白恒定区的各自的胺基，其中所述胺基存在于N-末端或Lys残基的侧链上。

12.权利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物选自聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯基乙基醚、聚乳酸(PLA)、聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)、脂质聚合物、壳多糖、玻尿酸、和其组合。

13.权利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物是聚乙二醇。

14.权利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物的分子量范围是从1至100kDa。

15.权利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区是无糖基化的。

16.权利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区由一个至四个结构域组成，所述一个至四个结构域选自C_H1、C_H2、C_H3和C_H4结构域。

17.权利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区进一步包括铰链区。

18.权利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区选自衍生自IgG、IgA、IgD、IgE、IgM的恒定区、或其组合或杂化物。

19.权利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的恒定区、其组合、和其杂化物。

20.权利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区是IgG4 Fc区。

21.权利要求20所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区是无糖基化的人IgG4 Fc区。