[发明专利]用于癌症诊断的针对密蛋白18.2的抗体

说明书

密蛋白(claudin)是位于上皮与内皮的紧密连接内的整合膜蛋白(integral membrane protein)。预测密蛋白具有四个跨膜区段，有两个胞外环，并且N端和C端均位于细胞质中。跨膜蛋白质密蛋白(CLDN)家族在上皮与内皮紧密连接的维持中发挥关键作用，并且还可能在细胞骨架的维持中以及在细胞信号转导中发挥作用。

密蛋白18(CLDN18)分子是整合跨膜蛋白(四次跨膜蛋白，tetraspanin)，其具有四个跨膜疏水区和两个胞外环(环1由疏水区1和疏水区2环绕而成；环2由疏水区3和疏水区4环绕而成)。CLDN18以两种不同剪接变体存在，这两种变体描述于小鼠和人中(Niimi，Mol.Cell.Biol.21：7380-90，2001)。所述剪接变体(Genbank登记号：剪接变体1(CLDN18.1)：NP_057453，NM_016369，和剪接变体2(CLDN18.2)：NM_001002026，NP_001002026)的分子量为约27.9/27.72kD。剪接变体CLDN18.1和CLDN18.2在包含第一个跨膜(TM)区和环1的N端部分中存在差异，而C端的蛋白质一级序列相同。参见图1。

CLDN18.1在正常肺的细胞中选择性表达，而CLDN18.2仅在胃细胞上表达。但是，CLDN18.2在正常胃中的表达局限于已分化的胃上皮短寿细胞中。已确认，CLDN18.2在多种肿瘤组织中表达。例如，已发现，CLDN18.2在胰腺癌、食管癌、胃癌、支气管癌、乳腺癌以及ENT肿瘤中表达。CLDN18.2是有预防和/或治疗原发肿瘤之价值的靶标，所述原发肿瘤例如胃癌、食管癌、胰腺癌、肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC))、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌和胆囊癌及其转移癌，特别是胃癌转移例如Krukenberg肿瘤、腹膜转移和淋巴结转移。

CLDN18.2在癌细胞和正常细胞之间的差异表达、其膜定位、其在大多数毒性相关正常组织中不存在、其在胃中的表达局限在可通过胃的靶阴性干细胞来补充的非必要的细胞群体-已分化的胃细胞，使得CLDN18.2成为癌症免疫治疗的有吸引力的靶标，并且在癌症治疗中使用靶向CLDN18.2的基于抗体的治疗剂(therapeutics)使高水平的治疗特异性成为可能。

CLDN18.2靶向抗体的临床应用面临人CLDN18.2与人CLDN18.1高度同源这一问题。可以成功地构建靶向CLDN18.2之示出人CLDN18.2与人CLDN18.1之间的序列差异的N端胞外结构域的CLDN18.2特异性抗体。为产生靶向CLDN18.2之N端部分并且具有使其能够在临床上用于诊断目的(例如，用于检测癌组织切片的细胞中CLDN18.2的表达)之特性的抗体而作出的尝试以失败告终。

本发明人出乎意料地发现，针对位于CLDN18.2的C端部分内的特定表位的抗体满足了用于抗体诊断应用之标准，特别是用于检测和鉴定表达CLDN18.2的细胞。最出乎意料地，这些抗体虽然针对CLDN18.1与CLDN18.2之间相同的序列，但并不靶向非癌肺细胞。

本发明的抗体可用于例如诊断癌症和/或确定癌细胞是否表达CLDN18.2。优选地，癌疾病或癌细胞以CLDN18.2在表面表达为特征。表达CLDN18.2的癌细胞是靶向CLDN18.2之治疗的合适的靶标，例如，使用针对CLDN18.2之抗体的治疗。在一个实施方案中，癌细胞表达或异常表达CLDN18.2，而相应的正常细胞不表达CLDN18.2或以较低水平表达CLDN18.2。表达CLDN18.2的细胞优选地选自致瘤性胃癌细胞、食管癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、头颈癌细胞和胆囊癌细胞。

发明内容

本发明涉及抗体或其抗原结合片段，其

(i)与具有氨基酸序列TEDEVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：5)或EVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：6)的肽相结合，和/或

(ii)与密蛋白18.2(CLDN18.2)相结合，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN18.2中具有氨基酸序列TEDEVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：5)或EVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：6)的表位相结合从而与CLDN18.2相结合。