[发明专利]CTLA‑4变体

说明书

对电子版提交的序列表的引用

与本申请一起提交的ASCII文本文件形式的电子版提交的序列表(名称：CTLA4101P1Sequencelisting.txt；大小：107,814字节；以及创建日期：2012年5月11日)的内容通过引用以其全部内容结合在此。

发明领域

本发明涉及包含细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)的变体(任选地与IgG Fc融合)的组合物，以及它们用于抑制T细胞活化，尤其是在如类风湿性关节炎(RA)的炎性病状背景下抑制T细胞活化的治疗用途。

背景

天然T细胞的活化被认为是通过一种双信号机制而进行的。在遇到抗原呈递细胞(APC)时，T细胞受体(TCR)与主要组织相容性复合体(MHC)分子背景下的肽相互作用并且由此向T细胞递送第一活化信号。此初始信号不足以引起T细胞活化，并且来自共刺激受体的第二信号是绝对需要的。最重要且最佳描述的共刺激受体之一是CD28，它与巨噬细胞、树突细胞以及B淋巴细胞和活化的T淋巴细胞表面上的CD80(B7.1)和CD86(B7.2)相互作用。

CD86基因编码I型膜蛋白(Swiss-Prot登录号P33681)。选择性剪接产生编码不同同种型的CD86基因的两种转录物变体。已描述了另外的转录物变体，但它们的全长序列尚未确定。

CD80(Swiss-Prot登录号P42081)中的相关蛋白质具有与CD86相似的二级结构。CD80分别与CD86共享26％相同的氨基酸残基和46％相似的氨基酸残基。CD80在静止APC中仅以低水平表达，但在活化之后可以被上调。CD80识别T细胞上的相同受体CD28和CD152(CTLA-4)，但结合后者的亲和力比CD86高大约2至4倍。

尚未鉴别到负责结合CD28和/或CTLA-4的共享线性肽表位(埃利斯(Ellis)等人，免疫学杂志(J Immunol.)，156,2700-2709)，但已发现二级结构(CD80和CD86的IgV片层)中的保守残基与CTLA-4相互作用(斯沃茨(Swartz)等人，自然(Nature)，410,604-608)。

来自CD28的信号转导导致T细胞活化和CTLA-4共抑制受体的上调。CTLA-4是免疫球蛋白超家族的一个成员。它以与CD28相比增加的亲和力和亲合力结合CD80和CD86，并且有效地下调活化信号。

已假定了关于CD80和CD86在结合CTLA-4方面的相对作用的不同理论。斯拉维克(Slavik)等人(免疫学研究(Immunol.Res.)19(1):1-241999)综述了CD28/CTLA-4和CD80/CD86家族的信号传导和功能。桑瑟姆(Sansom)(免疫学(Immunology 101:169-1772000))概述了其中调查CD80与CD86之间的差异的一些研究。

奥德拜西科(Odobasic)等人(免疫学124:503-5132008)调查了CD80和CD86在效应T细胞应答中的作用。此研究调查了抗CD80和抗CD86单克隆抗体在抗原诱导的小鼠关节炎模型中的作用。据报道，CD80和CD86两者的阻断引起与对照抗体治疗的小鼠相比疾病严重程度降低的趋势。基于用单独抗体治疗的结果，作者推断CD80通过下调全身性IL-4并且增加关节中的T细胞累积而使关节炎恶化，而CD86通过上调IL-17并且增加关节中效应T细胞的累积且不影响Th1或Th2发育而增大疾病严重程度。然而，此研究报道，当CD80和CD86两者皆被阻断时没有观察到关节炎严重程度的进一步附加降低，从而表明抑制任一共刺激分子足以获得最大疾病改善。这一模型是基于对直接注射在关节间隙中的抗原(在此研究中是BSA)的回忆应答。

另一研究使用鼠胶原诱导的关节炎模型，涉及破坏对内源性抗原(胶原)的耐受性。在此研究中，报道CD80和CD86两者的阻断都是获得最大益处所需要的(韦勃(Webb)等人欧洲免疫学杂志(Eur J.Immunol)26(10):2320-23281996)。

一种包含连接至修饰的IgG1Fc结构域的CTLA-4的胞外结构域的重组融合蛋白(“CTLA-4-Ig”)已显示体内结合CD80和CD86，并且有效抑制CD28介导的T细胞活化(科林威斯基(Kliwinski)等人，自身免疫杂志(J Autoimmun.)2005；25(3):165-71)。