[发明专利]新型和改进的流感疫苗

说明书

发明领域

本发明一般地涉及医学领域，且具体涉及微生物学、免疫学、和疫苗，且更具体地，流感疫苗。

发明背景

存在三种类型的流感病毒，A、B和C型。A和B型流感病毒负责人和动物中大部分感染和相关疾病。A型流感病毒已与所有流感大流行，与2009年中最新的一种有关。流感病毒具有锚定在其包膜上的两种主要的糖蛋白，血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。HA通过结合至细胞受体和介导病毒与细胞膜之间的融合，负责介导病毒进入靶细胞。HA也是宿主免疫应答的主要靶点和当前许可的疫苗的保护抗原。

由于其易于出错的复制和重配基因组区段的能力，流感病毒经历不断的基因改变，导致在HA中不断的抗原改变，及变体或新型病毒株的出现。过去的大流行均与变体或新性病毒株的出现相关，对此人群具有很少或没有预先存在的免疫力。基于HA和NA的抗原表征，A型流感病毒被分为16种HA(H1-H16)和9种NA(N1-N9)亚型，而B型流感病毒分为两大谱系。作为不断的抗原改变的结果，同一亚型内的病毒仍然可以是抗原性不同的或异源的。16种HA亚型基于HA蛋白的序列同源性分为两大系统发生组(I和II)，其每个还可以分为3个(H1、H2、H5和H6；H8、H9和H12；H11、H13、和H16)和两个进化枝(H3、H4、和H14；H7、H10、和H15)(Russell等人，Natl Acad Sci U S A.105:17736-17741,2008)。

流感疫苗

当前许可的流感疫苗主要是含有来自两种HA亚型(H1和H3)和一种B型病毒的抗原的三价灭活疫苗(TIV)(Fukuda等人，In Vaccines.Plotkin等人(著)，第4版，第339-370页，2003，Saunders.Philadelphia；Fiore等人，Curr Top Microbiol Immunol.333:43-82,2009)。最近，四价灭活疫苗(QIV)已被许可，其与TIV相同，但掺入了额外的B病毒。其没有被广泛使用。这些疫苗是毒株特异性的。为了匹配传播中的病毒，疫苗毒株每年更新。为针对大流行保护，也产生了靶向大流行病毒的单价灭活疫苗，诸如为2009年H1N1大流行的一种。当前TIV的功效仅是中度的，在年龄为18-65岁的成年人中具有59％的平均功效(Osterholm等人，Lancet Infect Dis12：36-44，2012)，其针对不良地匹配的变体病毒可能甚至更低。因此，存在改善目前的TIV的巨大需求。

使用鸡卵或包括MDCK和Vero的培养的鸟类或哺乳类细胞制造灭活疫苗。制造过程包括病毒的生长、收集、和纯化。病毒在制造过程中灭活，例如，在收集的步骤或在病毒纯化后。可以使用各种化学试剂和物理手段实现灭活。试剂包括甲醛、戊二醛、β-丙内酯、和Triton X-100，其中甲醛是最广泛使用的。物理手段包括加热、γ辐照、和UV灯。纯化的灭活的病毒可被直接作为全病毒(WV)抗原用于疫苗，或可以裂解为亚病毒粒子组分，以产生裂解疫苗(split vaccine)。裂解的亚组分可被进一步纯化，以产生亚单位疫苗。目前，裂解或亚单位抗原制成的TIV是最广泛使用的。也使用灭活的WV疫苗，其可优选的针对大流行，因为相比裂解或亚单位疫苗，它有更多的免疫原性，且可以更快地制作。

HA是保护抗原。灭活疫苗基于HA蛋白的量被标准化，HA蛋白的量作为疫苗的效力指标。它是由使用特异于待测试并在疫苗中使用的病毒株的HA的多克隆抗体的单一径向扩散(SRD)测试确定的。SRD在含有抗HA抗体的琼脂板上进行，其中测试抗原被与参考抗原一起置于由琼脂形成的小圆孔中(Wood等人，J Biol Stand.5:237-247,1977；Dev Biol Stand.64:169-177,1986)。抗原扩散进入琼脂允许抗原和抗体结合，且从而形成沉淀环。环的尺寸反映了存在于抗原或疫苗中HA的量。对于目前的TIV，效力标准是对于成人或老人群体每剂疫苗三种毒株每种15或60μg HA。TIV的免疫原性已被广泛评价。效力标准与如通过血细胞凝集抑制(HAI)和中和测试(NT)测量的一定水平的保护免疫应答的诱导相关。HAI滴度≥1：40通常被认为是人中的保护阈值。