[发明专利]用于治疗疼痛和COPD的极性糖脂的混合物

权利要求书

1.一种包含极性糖脂的组合物，所述极性糖脂可从蓝细菌颤蓝细菌属菌种(cyanobacterium Oscillatoria species,CyP)的细胞获得，所述组合物用于治疗和/或预防疼痛和/或慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)。

2.根据权利要求1的用于所述用途的组合物，其中所述极性糖脂是脂多糖(LPS)。

3.根据权利要求1或2的用于所述用途的组合物，其中所述极性糖脂是从蓝细菌颤蓝细菌属菌种中提取的。

4.根据权利要求1至3任一项的用于所述用途的组合物，其中所述极性糖脂可从蓝细菌颤蓝细菌属菌种通过如下方法获得，所述方法包括：

(a)提供所述蓝细菌；

(b)从所述蓝细菌提取极性糖脂；

(c)沉淀步骤(b)的极性糖脂；并且

(d)纯化步骤(c)的经提取并沉淀的极性糖脂。

5.根据权利要求4的用于所述用途的组合物，其中步骤(b)包括用包含促溶剂和非质子有机溶剂如氯仿的变性溶液的处理。

6.根据权利要求1至5任一项的用于所述用途的组合物，其中所述方法包括如下步骤：

(i)提供蓝细菌的浓缩物，如通过离心从培养基收集蓝细菌后获取的经冷冻干燥的浓缩物；

(ii)将所述浓缩物悬浮于溶液中；

(iii)任选地用微波和/或液体/固体分离如通过离心处理，并收集液相(称为上清)；

(iv)将蓝细菌的悬浮液或所述上清与包含促溶剂和非质子有机溶剂如氯仿的变性溶液混合；

(v)将步骤(iv)获得的溶液进行温育；

(vi)进行液体/液体分离，优选通过离心并收集水性液相；

(vii)沉淀糖脂级分，例如通过向所述上清添加盐和有机溶剂如丙酮；

(viii)将沉淀物重悬于水溶液中；

(ix)任选地用有机溶剂如异丙醇来处理在(viii)获得的溶液，离心，并收集液相，优选通过离心进行；并且

(x)通过离子交换柱并收集包含所述极性糖脂的级分。

7.根据权利要求1至3任一项的用于所述用途的组合物，其中所述极性糖脂可从蓝细菌颤蓝细菌属菌种通过如下方法获得，所述方法包括用变性促溶剂提取，用核酸酶处理所述提取物直到核酸污染水平低于或等于总重量的5％，在截留为30KDa的设备上进行分子分离，然后是回收更高分子量的级分。

8.根据权利要求7的用于所述用途的包含极性糖脂的组合物，其可从蓝细菌颤蓝细菌属菌种的细胞通过包括用变性促溶剂提取的方法来获得，其中所述提取步骤是如下述步骤(b)所述进行，核酸酶处理是如下述步骤(g)所述进行，分子分离是如下述步骤(k)所述进行，并包括进一步的下述步骤(a)、(c)-(f)、(h)-(j)和(l)-(m)：

(a)用水溶液悬浮蓝细菌颤蓝细菌属菌种的浓缩物，任选地为冷冻干燥浓缩物，其体积比优选包含1:1-1:2；

(b)将蓝细菌的悬浮物与2-4体积(优选约3体积)的变性溶液进行混合，所述变性溶液包含促溶剂、极性质子有机溶剂(优选苯酚)、以及非质子有机溶剂如氯仿；

(c)温育短于60分钟的时间；

(d)离心并收集液相，称为上清；

(e)通过向所述上清添加盐和有机溶剂(优选丙酮)来沉淀糖脂级分，并用水稀释过的乙醇来洗涤沉淀物(或沉淀)；

(f)将沉淀重悬于水溶液中，优选缓冲的水溶液；

(g)用核酸酶处理，优选内切核酸酶和/或外切核酸酶，并且随后用蛋白酶，优选蛋白酶K处理；

(h)通过添加盐和有机溶剂，优选丙酮来沉淀糖脂相；

(i)任选地用水稀释过的乙醇来洗涤沉淀，并重悬于包含离子表面活性剂，优选脱氧胆酸钠，以及季铵盐的水溶液中；

(j)如步骤(b)-(f)所述从所述水溶液中重新提取；

(k)在截留为30KDa的设备上进行分子分离；

(l)用水或缓冲的水溶液来回收高分子量极性糖脂级分并评估核酸或蛋白质污染的水平；

(m)回收并使用具有低于总重量5％的核酸污染的级分。