[发明专利]流感疫苗构建体

权利要求书

1.一种融合蛋白，包含

流感血凝素(HA)茎部抗原，其包含不超过两个二硫键，通过(a)用至少一个极性氨基酸取代至少一个疏水性氨基酸，(b)去除茎部中含有疏水性残基和半胱氨酸的区域进行修饰；和

至少一个三聚化结构域。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中两个或更多个疏水性氨基酸经极性氨基酸取代。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述三聚化结构域为折叠子(foldon)。

4.根据权利要求1所述的融合蛋白，在限定位置包含至少一个非天然氨基酸。

5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中所述非天然氨基酸在选自以下的限定位置：三聚化结构域的末端，或在非螺旋结构处的HA茎部结构域，或在HA茎部结构域表面(侧面)的暴露表面上。

6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述非天然氨基酸与病毒样颗粒连接。

7.根据权利要求1所述的融合蛋白，进一步包含用于蛋白酶裂解的外源性基序。

8.根据权利要求1所述的融合蛋白，进一步包含用于纯化的标签。

9.根据权利要求1所述的融合蛋白，包含图12中列出的修饰。

10.一种生产根据权利要求1所述的融合蛋白的方法，包括将编码与启动子可操作性连接的所述融合蛋白的多核苷酸序列引入容许表达的细胞中，并且表达所述编码的蛋白质。

11.一种生产根据权利要求1所述的融合蛋白的方法，包括将编码与启动子可操作性连接的所述融合蛋白的多核苷酸序列引入无细胞蛋白质合成反应混合物中并且温育足以合成所述融合蛋白的时间。

12.根据权利要求10所述的方法，进一步包括从所述反应混合物中分离所述融合蛋白，并且在容许形成三聚体的条件下使所述蛋白质重折叠的步骤。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述许可条件包括浓度从0.01％至0.1％的非离子型聚氧乙烯表面活性剂。

14.一种用于免疫的制剂，包含根据权利要求1-9中任一项所述的多肽；和药学上可接受的赋形剂。

15.根据权利要求14所述的制剂，进一步包含药学上可接受的佐剂。

16.一种使温血动物对流感免疫的方法，所述方法包括：

向所述动物施用根据权利要求14所述的药物制剂。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述动物为禽类动物。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述动物为哺乳动物。