[发明专利]多价重组禽疱疹病毒和用于免疫禽类的疫苗

说明书

本发明涉及一种重组禽类疱疹病毒，其包含至少两个重组核苷酸序列，各重组核苷酸序列编码不同的抗原肽，其中所述至少两个重组核苷酸序列插入到病毒基因组的不同的非编码区中，所述非编码区选自位于UL44与UL45之间的区、位于UL45与UL46之间的区、位于US10与SORF3之间的区、位于SORF3与US2之间的区。

发明领域

本发明通常涉及疫苗制剂领域。本发明具体涉及其中已经插入至少两个外源基因的多价重组疱疹病毒，以及它们用于同时诱导针对多种禽类疾病的保护性免疫的用途。

发明背景

家禽的肉和蛋是重要的食物来源，由于人口增长及它们的高性价比，其消耗量始终在增加。近来的禽流感疫情令舆论聚焦于家禽健康以及食品安全与保障。家禽疫苗技术举世瞩目。

表达病原体蛋白的病毒载体通常用作针对目标病原体的家禽疫苗。包括此类病毒载体的疫苗在受感染细胞中诱导外源病原体蛋白的表达，并由此诱发相应的T细胞免疫。

众所周知的是，所有疱疹病毒，包括火鸡疱疹病毒(HVT)和马立克氏病病毒(MDV)可以以潜在或持续性感染的状态永久存活在受感染动物体内。因此，开发了其中已整合衍生自病原体的外源基因的重组疱疹病毒，用作提高免疫动物的免疫力持续时间的病毒载体疫苗。

HVT的基因组结构、其作为对抗MDV的疫苗的广泛使用以及其在鸡中持久保留的能力，使得该病毒成为制造重组家禽疫苗的有吸引力的载体。

使用混入编码外源抗原的基因的重组疱疹病毒，已经开发了疫苗制剂以实现有效的禽类接种疫苗。通过插入的外源DNA序列，此类疫苗制剂能够针对MDV(载体)和另一种禽类疾病进行接种。

尽管此类疫苗制剂能够有效地针对多种致命疾病对禽类进行接种，当向鸟类注入两种或多种各自携带不同的外源抗原基因的重组疱疹病毒时，会发生病原体之间的竞争和免疫抑制。

因此，将着重研究同时针对不同疾病免疫的多价重组疱疹病毒(即携带至少两种不同的抗原基因)。但是，迄今为止，表达多种外源基因的重组HVTs(rHVTs)已证明是不稳定的，并且在培养细胞中反复传代的过程中所有或部分该外源基因被删除。因此，此类不稳定的多价病毒载体不能用作有效的疫苗。

因此，需要稳定的多价重组病毒载体，能够在受感染的细胞中共同表达外源基因。

发明内容

由申请人进行的工作获得了令人惊讶的发现——在疱疹病毒基因组中的一组特定插入位点可用于稳定地插入和表达两种或多种抗原基因，由此提供用于禽类接种的有效的多价病毒载体。更特别地，申请人已经发现，几种插入位点可用于同时结合不同的抗原基因，提供稳定的多价重组病毒载体。

因此，本发明涉及一种重组禽类疱疹病毒，其包含至少两个重组核酸序列，各重组核苷酸序列在禽类细胞中编码和表达抗原肽，其中所述至少两个重组核苷酸序列插入到病毒基因组的不同非编码区，该非编码区选自位于UL44与UL45之间的区、位于UL45与UL46之间的区、位于US10与SORF3之间的区和位于SORF3与US2之间的区。

在一个优选实施方案中，在位于UL45与UL46之间的区中插入一个重组核苷酸序列，并在位于UL44与UL45之间的区、位于US10与SORF3之间的区或位于SORF3与US2之间的区中插入一个重组核苷酸序列。如本申请中所示，此类重组禽类疱疹病毒构建体在受感染的禽类细胞中提供了两种相应抗原肽的特别稳定与有效的表达。

特别地。有利的是，这两个或多个重组核苷酸序列在鸡胚胎成纤维(CEF)细胞中共同表达，即使在10次传代或更多次传代后，优选甚至在15次传代后。