[发明专利]同时表达猪α干扰素和猪γ干扰素的重组腺病毒

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组病毒，所述重组病毒对口蹄疫病毒显示抑制效果。更具体地，涉及一种重组腺病毒，所述重组腺病毒通过口蹄疫2A基因的插入来同时表达猪α干扰素和γ干扰素，以能够一次性处理(接种、给药)猪α干扰素和猪γ干扰素，从而能够增强对口蹄疫病毒的抑制效果。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease；FMD)为感染于偶蹄动物的病毒水疱性疾病，其特征在于，复制快，传播快。这种疾病由于经济重要性，由国际兽疫局(OIE)被分类为A类(ListA)疾病，在国家之间的畜产品的贸易中，为起到非常重要的作用的因素。病原体为单链的正义RNA病毒，属于病毒科(Piconaviridae)口蹄疫病毒(Aptho virus)属，分为七个不同的血清型(A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2、SAT3)。

将口蹄疫发作(outbreak)时作为防御对策而使用的紧急疫苗(E mergency vaccination)接种于猪时，平均过七天后，形成对口蹄疫病毒感染的防御能力(J.S.Salt et al，1998，Vaccine 16:746-754)。然而，猪依靠疫苗形成抗体慢，并且排出的病毒量比牛明显多。并且，猪被感染后会在24小时内，将病毒从呼吸器官排出，因此，接种疫苗后到产生防御能力之前，病毒传播的危险性会更高。

因此，对其的对策为提出口蹄疫病毒抑制剂。其中，将重组腺病毒用作传递系统的包含α干扰素的I类型干扰素使用于口蹄疫中而有效防御口蹄疫病毒的研究结果被报道之后(Chinsangaram，J.et al.，2001，Journal of Virology 75:5498-5503)，确认过将表达γ干扰素的重组腺病毒与表达α干扰素的腺病毒混合而使用的情况下，能够得到提高的抑制效果(Maraes MP et al.，2007，Journal of Virology 81:7124-7135)。α干扰素是最广为人知的直接的病毒抑制物质，γ干扰素是在辅助T细胞(T-helper cell)和天然杀伤细胞(natural killer cell)中起着诱导分泌细胞因子(cytokine)的作用，从而显示对病毒的直接或间接的抑制效果。由此，虽然同时使用α干扰素和γ干扰素有利于多种免疫诱导，但是γ干扰素的抗病毒效果相对于α低，因此单纯地混合使用时，存在抑制效率降低的问题。

一方面，口蹄疫病毒2A序列是在口蹄疫病毒基因中发生自切割(self cleavage)的部分，在插入于基因中时，基因转录后引起自切割，使其能够表达两个蛋白质。报道称2A序列与具有相似作用的内部核糖体进入位点(Internal ribosomal entry site，IRES)序列相比，不仅基因大小小，而且由于基因被切割，从而形成两个蛋白质的效率高9倍。(SH Ha et al，2010，Plant biotech，8:928-938)。

发明内容

要解决的技术问题

对此，本发明人希望通过使用对现有动物最适合使用，并且对抑制效果的可能性大的干扰素，以更低的费用和简便的方法开发出一种在动物中能够更有效地抑制病毒的抑制剂并提出，如果通过插入口蹄疫2A序列能同时表达猪α干扰素和猪γ干扰素，则具有能够一次性处理这些干扰素的效果，从而确认了能够更有效地提供抑制口蹄疫病毒的效果，由此完成了本发明。

因此，本发明的目的在于，提供一种能够同时表达猪α干扰素和γ干扰素的重组病毒。

技术方案

为了达到上述目的，本发明提供一种重组腺病毒或质粒，所述重组腺病毒或质粒包含按照猪α干扰素、口蹄疫病毒2A及猪γ干扰素基因的顺序排列的SEQ ID NO：2的碱基序列。

有益效果

本发明的重组腺病毒可以同时表达猪α干扰素和猪γ干扰素，从而能够可以一次性地处理猪干扰素α和猪γ干扰素，并且，比起将这些各个干扰素单独使用或混合使用，能够更经济并且简便地使用，能够提供更高效率更高水准的抑制口蹄疫病毒的效果。

附图说明

图1示出用于生产能够同时表达猪α干扰素和γ干扰素的重组腺病毒的设计策略。

图2是在重组腺病毒中，通过利用蛋白质印迹法(Western blot)来确认猪α干扰素及γ干扰素的表达的照片。

图3是对重组腺病毒各滴度口蹄疫病毒的抑制程度进行比较的图表。