[发明专利]使树突细胞成熟的组合物以及用其制备抗原特异性树突细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种使树突细胞成熟的组合物，以及一种使用该组合物制备抗原特异性的树突细胞的方法。

背景技术

树突细胞(DC)是抗原提呈细胞(APC)，具有在免疫系统的细胞中提呈抗原的最大潜力。树突细胞刺激还没有暴露至抗原的T细胞(被称为幼稚T细胞)，从而诱导免疫反应。因此，树突细胞是独特的免疫细胞，它与其它的APC不同，能够有效诱导初次免疫应答并且活化记忆T细胞。已知，树突细胞在它的表面表达高浓度的共刺激分子，以及MHC分子(I/II)，而且树突细胞释放T细胞活化所需的细胞因子(IFN-α、IL-12、IL-18)。这是为什么树突细胞能够诱导潜在的免疫应答的原因。通过释放与Th1免疫相关的细胞因子(诸如IFN-α、IL-12等)，I型树突细胞能够诱导抗原特异性的Th1细胞的增殖以及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活化，因此I型树突细胞在免疫疗法中具有有益的应用。

为了在癌症的免疫疗法中利用树突细胞，必需使用体外使单核细胞分化成树突细胞，并使未成熟的树突细胞成熟为在诱导T细胞免疫时有用的成熟树突细胞的技术。在本领域中，从体内的单核细胞制备未成熟的树突细胞的技术以及成熟的工序还没有标准化。具体地，通过如下工序实现从单核细胞分化得到的未成熟树突细胞的成熟：使未成熟树突细胞能够迁移到淋巴结中，未成熟树突细胞在淋巴结中将抗原片段提呈给幼稚T细胞，以诱导Th1免疫应答。与未成熟的树突细胞相比，完全成熟的树突细胞在它的表面上表达MHC I和II分子以及高浓度的T细胞共刺激分子(即CD80和CD86)。此外，成熟的树突细胞分泌很多细胞因子，这些细胞因子直接参与诱导T细胞免疫应答。在经历了成熟引起的此种改变之后，树突细胞大大增加了诱导T细胞免疫应答的潜能。

已知，MCM(单核细胞条件培养基)可用于树突细胞的成熟。通过体外培养单核细胞制备的MCM用作成熟因子的来源。但是，MCM途径并不能确保从一个成熟工序至另一成熟工序都有一致的条件，因为，单核细胞响应于外部信号所释放的促炎细胞因子的数量在不同人之间有很大不同。此外，另一缺点是需要大量的外周血单核细胞来制备MCM。作为MCM途径的替代，开发了选自MCM组分中的重要的细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE₂)组成的细胞因子鸡尾酒。细胞因子鸡尾酒能够稳定生产具有相对较高功能的树突细胞，且解决了MCM的问题。但是，仅有细胞因子鸡尾酒不能提供充分成熟的树突细胞。

韩国专利申请未经审查的公开第10-2011-0035633号公开了，通过使用Th1细胞核树突细胞在体外生成细胞毒性T细胞。但是，因为这种方法利用的是还没有完全成熟的树突细胞，因此难以预期由此方法能够得到足够的免疫治疗效果。

因此，非常需要更有效的树突细胞的成熟技术，通过该成熟技术能够诱导针对癌症的潜在的抗原特异性免疫，从而产生对癌症的最好的免疫治疗效果。

发明内容

因此，本发明的一个目的是提供使树突细胞成熟的组合物，该组合物增强树突细胞诱导免疫应答的能力，降低树突细胞的抗原非特异性的免疫应答，并且提高树突细胞的抗原特异性的免疫应答，从而发挥最好的免疫治疗效果。

本发明的另一目的是提供抗原特异性的树突细胞，该抗原特异性的树突细胞通过使用所述使树突细胞成熟的组合物来制备。

本发明的又一目的是提供制备抗原特异性的树突细胞的方法。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种使树突细胞成熟的组合物，该组合物包括：作为成熟因子的选自白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、前列腺素E2(PGE2)、溶链菌制剂(Picibanil)(OK432)和聚肌胞(Poly IC)中的至少一种。

根据本发明的另一方面，本发明提供了抗原特异性的树突细胞，该抗原特异性的树突细胞通过使用上述组合物制备。

根据本发明的又一方面，本发明提供了制备抗原特异性的树突细胞的方法，该方法包括：使用抗原使未成熟的树突细胞致敏；以及，使用选自以下成熟因子中的至少一种成熟因子来处理经过致敏的树突细胞：白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、前列腺素E2(PGE2)、溶链菌制剂(OK432)和聚肌胞。

除了提高树突细胞诱导免疫应答的能力之外，本发明的成熟组合物的组成还能够提高抗原特异性的T细胞免疫应答，同时降低非特异性的免疫应答，从而带来最好的免疫治疗效果。

附图说明