[发明专利]生物技术2-羟基异丁酸生产

权利要求书

1.表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧细菌或产乙酸细菌。

2.根据权利要求1的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌被基因修饰以使得其与各自的野生型菌株相比，具有降低的合成聚羟基丁酸酯的能力。

3.根据权利要求2的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌具有聚羟基丁酸酯合成酶基因敲除。

4.根据权利要求1-3任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌不能合成聚羟基丁酸酯。

5.根据权利要求1-4任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌是选自包含甲烷细菌(Methanobacterium)、醋酸杆菌(Acetobacterium)、脱硫弧菌(Desulfovibrio)、脱硫单胞菌(Desulfomonas)、副球菌(Paracoccus)、无色杆菌(Achromobacter)、产碱杆菌(Alcaligenes)、假单胞菌(Pseudomonas)、诺卡氏菌(Nocardia)和贪铜菌(Cupriavidus)的组的氢氧细菌，且优选是贪铜菌菌株，最优选是钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator) H16，或者是选自包含梭菌(Clostridium)、穆尔氏菌(Moorella) 和厌氧醋菌 (Acetoanaerobium)、醋酸杆菌(Acetobacterium)、古球菌(Archaeoglobus)、丁酸杆菌(Butyribacterium)、Carboxydibrachium、Carboxydocella、一氧化碳嗜热菌(Carboxydothermus)、柠檬酸杆菌(Citrobacter)、脱硫肠状菌(Desulfotomaculum)、真细菌(Eubacterium)、甲烷八叠球菌(Methanosarcina)、甲烷嗜热杆菌(Methanothermobacter)、产醋杆菌(Oxobacter)、消化链球菌(Peptostreptococcus)、红假单胞菌(Rhodopseudomonas)、红螺菌(Rhodospirillum)、红长命菌(Rubrivivax)、Thermincola、热球菌(Thermococcus)、热石杆菌(Thermolithobacter)、嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter)和Thermosyntrophicum的组的产乙酸细菌。

6.根据权利要求1-5任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌表达包含SEQ ID NO 1的核酸或其变体或由所述核酸编码的多肽或所述多肽的变体，并且表达包含SEQ ID NO 2的核酸或其变体或由后一种核酸编码的多肽或后一种多肽的变体。

7.根据权利要求1-6任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌表达，除了2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶外，还有MeaB蛋白，优选由SEQ ID NO 3编码的多肽或其变体。

8.根据权利要求1-7任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌能够合成3-羟基丁酰-辅酶A。

9.根据权利要求1-8任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌表达β-酮硫酶和乙酰乙酰基-CoA还原酶。

10.生产2-羟基异丁酸的方法，包括

c) 在水性介质中使根据权利要求1-9任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌与包含氢气和二氧化碳的气体混合物接触。

11.根据权利要求10的方法，其中所述气体混合物中氢气的分压为0.1-100巴，更优选0.2-10巴，最优选0.5-4巴，而二氧化碳分压为0.03-100巴，更优选0.05-1巴，最优选0.05-0.3巴。

12.根据权利要求10-11任一项的方法，其中所述细菌耐受氧的存在，且水溶液是有氧的。