[发明专利]用于产生细胞培养基的方法

说明书

本发明涉及用于生产干粉细胞培养基的方法。制备和使用通过共冻干法产生的混合颗粒产生了均质混合的细胞培养基。

发明背景

水溶液中的细胞培养基可以提供环境，其支持和维持细胞生长和/或为某些产物的靶向产生提供维持期望的生理学细胞条件。

取决于培养的生物的类型和/或应当支持的目标生理学状态，细胞培养基包含组分(通常一百种以上的不同组分)的复杂混合物。

增殖哺乳动物、昆虫或植物细胞所需的细胞培养基通常比支持细菌、酵母或真菌生长的培养基复杂得多。

研发的第一种细胞培养基由未确定成分组分，例如血浆、血清、胚胎提取物或其他未确定成分生物提取物或蛋白胨组成。因此，随着化学成分确知培养基的研发，培养基得到了重大的改进。化学成分确知培养基通常包含但不特定地限于氨基酸、维生素、金属盐、抗氧化剂、螯合剂、生长因子、缓冲液、激素，以及本领域技术人员已知的多种物质。

一些细胞培养基提供为无菌水溶液。液体培养基的缺点是其减少的贮藏期限以及难以运输和储存。因此，目前许多细胞培养基都提供为精磨的干粉混合物。通常出于与其他补充物一起溶解于水和/或水溶液以及设计的溶解状态为目的而生产它们，用于为细胞提供生长和/或从所述细胞中产生生物药物的基本营养物质。

以粉末形式生产细胞培养基是非常关键的。通常通过混合和研磨方法，例如球磨法混合培养基的经干燥组分来生产粉末培养基。

在研磨方法中，在另一方面，通常很难产生均质的混合物，因为需要匀浆多达9个数量级差异浓度的成分。这意为需要将1千克培养基组合物中存在的微克以下的组分均质地分配在细胞培养基中。

已经通过冻干预先制备的液体培养基来试图克服这些困难。然而，在冻干方法中，一些培养基组分可能变得不溶或者在冻干后聚集，使得难以或者不能再增溶。此外，如果尝试通过例如冻干法这样的方法来产生粉末补充物，许多培养基补充物，特别是血清补充物例如FBS，都显示出活性的基本损失或者表现出完全的失活。

因此，存在提供用于生产干粉细胞培养基改进方法的明确需求，该方法不具有上述缺点。

发明概述

已经发现，可以生产均质地分配的尤其是以低量存在的组分的粉末细胞培养基。这可以通过制备至少一种低丰度组分和以更高浓度在培养基中存在的一种载体组分的混合颗粒来实现。可以通过共冻干法制备这些混合的颗粒，然后可以加入到组分的混合物中来进行研磨。

因此，本发明涉及生产细胞培养基的方法，其包括

a)共冻干细胞培养基的至少两种组分

b)将步骤a)中产生的一种或多种共冻干物与细胞培养基的其他组分混合

c)将步骤b)的混合物进行研磨。

在优选的实施方案中，步骤a)中一种组分(低丰度组分)的量小于其他组分(高丰度组分)的量的5％(按重量计)。这意为，如果使用100g的高丰度组分，那么使用了小于5g的低丰度组分。

在优选的实施方案中，高丰度组分是氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、氯化钙(CaCl₂)、硫酸镁(MgSO₄)或氯化镁(MgCl₂)。

在另一个优选的实施方案中，在步骤a)中，通过产生组分的水溶液、冷冻混合物并在减压下去除液体来进行共冻干。

在另一个优选的实施方案中，在盘击式研磨机(jet mill)、菲兹研磨机(fitz mill)或喷射式研磨机(jet mill)中研磨来自步骤b)的混合物。

在另一个优选的实施方案中，在研磨之前将来自步骤b)的混合物冷却至0℃以下的温度。

在另一个实施方案中，通过分别共冻干细胞培养基的至少两种组分，来产生两种或多种不同的共冻干物。

本发明还涉及通过本发明方法生产的粉末细胞培养基。

本发明还涉及包含一种或多种共冻干物的粉末细胞培养基。

在优选的实施方案中，粉末细胞培养基包含两种或多种共冻干物。

在优选的实施方案中，在至少一种共冻干物中，至少一种组分的量小于至少一种其他组分的量的1％。

在另一个优选的实施方案中，至少一种共冻干物包含氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、氯化钙(CaCl₂)、氯化镁(MgCl₂)或硫酸镁(MgSO₄)。

发明描述

图1显示了与其他培养基比较，使用本发明培养基达到的CHO S细胞的完整存活的细胞密度。其他细节可见于实施例3。