[发明专利]哺乳动物细胞中使用独特的高密度生长和转染培养基与表达增强剂对的高产量瞬时表达

权利要求书

1.一种在培养的293细胞中产生重组蛋白的方法，所述方法包含：

在细胞培养基中获得包含293细胞的悬浮培养物，所述悬浮培养物具有在2×10⁶到2×10⁷个细胞/毫升之间的细胞密度；

用表达载体转染所述293细胞，所述表达载体含有能够产生所表达的蛋白质的基因序列；

将所述经转染的293细胞孵育第一时间段；

使所述经转染的293细胞与至少一种表达增强剂组合物接触，所述表达增强剂组合物包含丙戊酸和/或丙戊酸钠；

将所述经转染的293细胞在所述表达增强剂组合物存在下孵育第二时间段，使得所述载体表达所述蛋白质；以及

在所述第二时间段之后收获所述经转染的293细胞，

其中所述细胞培养基在所述转染步骤之后不经过更换、补给或补充。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养的293细胞是适宜于在高密度条件下生长的悬浮培养物。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述悬浮培养物包含293细胞、293细胞的衍生物、293F细胞或293F细胞的衍生物，其中所述细胞已适宜于在高密度条件下生长。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述悬浮培养物包含293F细胞的衍生物。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述悬浮培养物的体积在200μL到5L范围内。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达增强剂组合物还包含：丙酸钠或乙酸锂。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述丙戊酸和/或丙戊酸钠的浓度在0.20mM到25mM范围内。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述丙戊酸和/或丙戊酸钠浓度在以下范围内：0.25mM到24mM。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述表达增强剂组合物包含丙酸钠。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述培养物中丙酸钠的最终浓度在0.2mM到100mM范围内。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述培养物中丙酸钠的最终浓度在以下范围内：0.5到80mM。

12.根据权利要求6所述的方法，其中所述表达增强剂组合物包含乙酸锂。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述培养物中乙酸锂的最终浓度在0.25到25mM范围内。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述培养物中乙酸锂的最终浓度在以下范围内：0.26mM到20mM。

15.根据权利要求5所述的方法，其中所述悬浮培养物的体积在25mL到50L范围内。

16.根据权利要求5所述的方法，其中所述悬浮培养物的体积在100mL到1L范围内。

17.根据权利要求5所述的方法，其中所述悬浮培养物的体积在200mL到500mL范围内。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述转染步骤的细胞密度在2×10⁶到2×10⁷个细胞/毫升之间。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述转染步骤的细胞密度在2×10⁶到6×10⁶个细胞/毫升范围内。