[发明专利]有用微生物和目标物质的制备方法

权利要求书

1.原核生物，该原核生物具有下述的(a)～(d)所述的所有性质，以调节将由碳源生成生长所必须的代谢物M的生物合成途径中作为中间代谢物的化合物P转换成代谢物M的酶X的表达量，从而使化合物P蓄积，

(a)在与从该原核生物所能利用的碳源到化合物P的生物合成有关的酶组中，任意一个以上的酶的活性较该原核生物的野生株有所增强；

(b)通过在编码酶X的蛋白的野生型基因x的翻译区、该基因的翻译调节区或促进基因x转录的启动子区中具有1个以上的核苷酸的取代、缺失或添加的突变，酶X的活性缺损或降低；

(c)利用与上述促进基因x转录的本来的启动子不同、且转录被抑制物R的蛋白抑制的启动子A来控制编码活性型酶X的DNA的转录；

(d)具有1拷贝以上的编码抑制物R的蛋白的基因z，该基因的转录被该基因的本来的启动子和/或不同于该启动子的诱导启动子B控制，

上述编码抑制物R的蛋白的基因z为谷氨酸棒状杆菌ATCC13032株的vanR基因、pcaR基因、或rhcR基因，

上述启动子B是通过添加选自阿魏酸、香草酸、香兰素、苯甲酸、3-羟基苯甲酸、间苯二酚、4-羟基苯甲酸、2,4-二羟基苯甲酸、果糖和蔗糖的化合物而诱导的启动子，

上述启动子A为谷氨酸棒状杆菌ATCC13032株的vanA基因的启动子、pobA基因的启动子、pcaH基因的启动子、或rhcH基因的启动子，

上述化合物P和上述代谢物M的组合为下述(f)：

(f)化合物P为3-脱氢莽草酸、代谢物M为莽草酸，

上述原核生物为谷氨酸棒状杆菌或大肠杆菌，

上述酶X为莽草酸脱氢酶，

上述(a)中所述的酶选自3-脱氢奎尼酸合成酶、3-脱氢奎尼酸脱水酶、3-脱氧-D-阿糖基庚糖酮酸-7-磷酸合成酶、转酮醇酶、转醛醇酶、葡萄糖-6-磷酸1-脱氢酶、磷酸烯醇式丙酮酸合成酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶中的任意一个以上。

2.权利要求1所述的原核生物，其特征在于：性质(b)所述的促进基因x转录的启动子区中的取代突变是将该启动子的整个区域或一部分区域取代成性质(c)所述的启动子A的DNA的突变。

3.权利要求1所述的原核生物，其特征在于：在上述原核生物所具有的代谢化合物P的酶中，酶X以外的任意一个以上的代谢酶的活性缺损或降低。

4.化合物P的制备方法，其特征在于：在抑制了启动子A转录的状态下、在碳源的存在下培养权利要求1～3中任一项所述的原核生物。

5.化合物P的制备方法，其特征在于：在抑制了启动子A转录的状态下、在碳源的存在下培养权利要求1～3中任一项所述的原核生物，之后施加诱导启动子B转录的处理，使抑制物R的蛋白表达量增加，从而减少代谢物M的生成量。

6.化合物P的制备方法，其特征在于：在解除了启动子A的转录抑制的状态下、在碳源的存在下培养权利要求1～3中任一项所述的原核生物，之后施加诱导启动子B转录的处理，使抑制物R的蛋白表达量增加，从而减少代谢物M的生成量。