[发明专利]有助于选择被特定免疫球蛋白基因重组牛痘病毒感染的细胞的融合蛋白

权利要求书

1.一种用于选择编码抗原特异性免疫球蛋白重链可变区或其抗原结合片段的方法，包括：

(a)将编码免疫球蛋白重链融合多肽的重组牛痘文库引入允许牛痘病毒感染的宿主细胞群体中，所述重组牛痘文库包含在牛痘病毒载体中构建的编码多个免疫球蛋白重链融合多肽的第一多核苷酸文库，其中所述牛痘病毒载体包含(1)编码包含免疫球蛋白重链CH1结构域的第一多肽区段的第一多核苷酸，(2)编码包含位于所述CH1结构域下游的牛痘A56R胞外包膜病毒(EEV)特异性膜蛋白的柄区、跨膜结构域和胞内结构域的第二多肽区段的第二多核苷酸，和(3)编码位于所述CH1结构域上游的免疫球蛋白重链可变区或其片段的第三多核苷酸；

(b)将一个或多个编码免疫球蛋白轻链的多核苷酸引入所述宿主细胞群体中，

其中免疫球蛋白融合蛋白能够与免疫球蛋白轻链组合，以形成免疫球蛋白分子的抗原结合结构域；

(c)允许EEV从所述宿主细胞释放；

(d)从上清液收集释放的EEV；

(e)将释放的EEV接触抗原；和

(f)回收第一多核苷酸文库的编码在EEV的膜表面上表达并且对于所述抗原具有特异性的免疫球蛋白重链融合多肽的多核苷酸。

2.权利要求1的方法，进一步包括：

(g)将(f)中回收的多核苷酸引入允许牛痘病毒感染的第二宿主细胞群体中；

(h)将一个或多个编码免疫球蛋白轻链的多核苷酸引入所述宿主细胞群体中；

(i)允许胞外包膜病毒(EEV)从所述宿主细胞释放；

(j)从上清液收集释放的EEV；

(k)将释放的EEV接触抗原；和

(l)回收第一文库的编码在EEV的膜表面上表达并且对于所述抗原具有特异性的免疫球蛋白重链融合多肽的多核苷酸。

3.权利要求2的方法，进一步包括重复步骤(g)-(l)一次或多次，由此富集所述第一文库的编码作为特异性结合所述抗原的免疫球蛋白重链融合多肽的部分的免疫球蛋白重链可变区或其抗原特异性片段的多核苷酸。

4.权利要求1的方法，进一步包括分离从所述第一文库回收的多核苷酸。

5.权利要求1-4任一项的方法，其中第一多肽区段进一步包含重链CH2结构域、重链CH3结构域或其组合。

6.权利要求5的方法，其中所述第一多肽区段包含人IgG恒定区或其一部分。

7.权利要求1-4任一项的方法，其中(b)中的一个或多个编码免疫球蛋白轻链的多核苷酸各自包含在牛痘病毒载体中。

8.权利要求1-4任一项的方法，其中(b)中的一个或多个编码免疫球蛋白轻链的多核苷酸包含在质粒载体中。

9.一种融合蛋白，包含与以下的N末端融合的免疫球蛋白重链可变区结构域：(a)由SEQ ID NO：11的氨基酸117-421组成的多肽区段，其是与牛痘病毒A56R蛋白的柄区、跨膜结构域和胞内结构域融合的人IgG1的CH1结构域；或(b)由SEQ ID NO：30的氨基酸117-653组成的多肽区段，其是与牛痘病毒A56R蛋白的柄区、跨膜结构域和胞内结构域融合的人IgG1的完整恒定区；其中所述融合蛋白酶可以在牛痘胞外包膜病毒(EEV)的表面表达，其中当所述融合蛋白与轻链可变结构域组合，可以形成功能性抗体或其抗原结合片段。

10.权利要求9的融合蛋白，进一步包含用于促进所述融合蛋白在EEV表面表达的信号肽。

11.编码权利要求9或10的融合蛋白的多核苷酸。

12.包含权利要求11的多核苷酸的载体。

13.包含权利要求11的多核苷酸或权利要求12的载体的重组牛痘病毒。

14.用权利要求13的重组牛痘病毒感染的宿主细胞。