[发明专利]Toll-样受体及免疫刺激性寡核苷酸

说明书

本发明涉及：toll‑样受体；包含此类toll‑样受体的细胞；检测免疫刺激性寡脱氧核苷酸的方法，其中此类方法使用此类toll‑样受体；通过使用该方法检测到的免疫刺激性寡脱氧核苷酸；此类免疫刺激性寡脱氧核苷酸在医药中的用途；以及包含此类免疫刺激性寡脱氧核苷酸的疫苗。

本发明涉及：杂合toll-样受体；包含此类toll-样受体的细胞；免疫刺激性寡脱氧核苷酸检测方法，其中，该方法使用此类toll-样受体；通过使用该方法检测到的免疫刺激性寡脱氧核苷酸；此类免疫刺激性寡脱氧核苷酸在医药中的用途；以及包含此类免疫刺激性寡脱氧核苷酸的疫苗。

在过去二十年中，在免疫科学中已发现，脊椎动物免疫系统拥有检测微生物感染和通过受体介导的对特有且保守的病原体特征的识别（所谓的病原体相关分子模式(PAMPs)与相关的宿主病原体识别受体(PRRs)相互作用）而引发快速免疫活化作用的机制(Iwasaki A, Medzhitov R. 2001和 Medzhitov R., 2009)。

目前清楚的是，这些PAMP中存在某些形式的病原体脱氧核糖核酸 (DNA)。在1995年，有报道称细菌DNA中非甲基化的 CpG 基序引发鼠B-细胞活化作用 (Krieg等人1995)。该研究首次在细菌免疫刺激性含非甲基化CpG的DNA的特异性识别与之前公认的CpG抑制以及哺乳动物DNA中广泛存在的CpG 甲基化之间建立起联系。最有效的B细胞刺激性非甲基化CpG 寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)显示出拥有序列元件GACGTT。

这一领域中下一个里程碑性的论文是由日本大坂Shizuo Akira的实验室发表的(Hemmi等人2000)。通过在小鼠中的基因克隆以及靶向基因敲除方法，可以毫无疑义地表明小鼠中对CpG-ODN的细胞应答是由toll-样受体 9 (TLR9)介导的。接下来表明了CpG-ODN是主要通过NF κ-B途径的TLR9信号传导的激动剂 (Medzhitov 2001)。在接下来的十年中，已有相当多的关于基础研究主题以及关于一般性的潜在免疫治疗应用的研究发表(例如综述于Krieg 2002, 2003, 2006; Klinman 2004, Vollmer 2005, Wilson等人2006,Kindrachuk等人2008, Dorn和Kippenberger 2008, Vollmer和Krieg 2009, Wilson等人2009)。许多综述性文章关注于CpG-ODN的抗感染应用(Krieg 2007)，TLR9 激动剂在癌症治疗中的应用(Krieg 2007, Weiner 2009), TLR9 活化作用用于哮喘和过敏反应的治疗(Kline 2007, Kline 和Krieg 2008, Fonseca和Kline 2009)以及作为疫苗佐剂(Klinman等人2004, Klinman 2006, Daubenberger 2007, Wagner 2009, Mutwiri等人2009,Klinman等人2009)。

也已描述和讨论CpG ODN在兽医应用中，特别是在牛、猪、绵羊、犬、鸡和鱼中作为免疫刺激性试剂和疫苗佐剂 (Babiuk等人2003, Carrington和Secombes 2006, Griebel等人2005, Mutwiri等人2003, Singh和O'Hagan 2003, Werling和Jungi 2003)。

迄今为止，对于用作人和非人物种的免疫调节剂的特异性CpG ODN's的设计仍是非常随机的。其原因是多方面的；首先，尚无有关用于人TLR's的免疫调节CpG 基序与非人哺乳动物物种TLR's的免疫调节CpG 基序之间关联的任何知识。其次，还没有可用的具有信噪比水平低至足以允许选择性检测极低浓度CpG ODN's效果的含哺乳动物 TLR的体外细胞系统。此外，没有可用的高通量筛选方法，即使存在这样的高通量筛选方法，也没有作为免疫调节剂的CpG ODN's体内相对于体外效力之间的明确关联。