[发明专利]鸟分枝杆菌亚种副结核分枝杆菌的检测方法

说明书

本发明涉及用于特异性检测和任选地定量来自于个体样品的鸟分枝杆菌亚种副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium spp.paratuberculosis)(MAP)的方法。为此，根据本发明的方法，通过核酸扩增和特异性寡核苷酸来检测样品中IS900域的存在。另一方面，本文提供了用于通过扩增方法对样品中MAP进行特异性检测的检验试剂盒。最后，公开了适用于特异性检测MAP的特异性寡核苷酸。

技术领域

本发明涉及用于特异性检测和任选地定量来自于个体样品的鸟分枝杆菌亚种副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium spp.paratuberculosis)(MAP)的方法。为此，根据本发明的方法，通过核酸扩增和特异性寡核苷酸来检测样品中IS900域(IS900region)的存在。另一方面，本文提供了用于通过扩增方法对样品中MAP进行特异性检测的检验试剂盒。最后，公开了适用于特异性检测MAP的特异性寡核苷酸。

现有技术

鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)是一种具有多种宿主的分枝杆菌种(mycobacterium species)。一方面，鸟分枝杆菌可在禽类中引起结核病，另一方面其也是人类和其它哺乳动物中的病原体。鸟分枝杆菌的一个种是鸟分枝杆菌亚种副结核分枝杆菌(MAP)，其为分枝杆菌属(genus Mycobacterium)的专性(obligate)病原菌。MAP被视为是引起副结核病(Johne’s disease)的原因，特别是在反刍动物身上会出现该疾病。除了反刍动物和人以外，在其它动物物种，特别是野生动物，尤其是野兔、鸟类、野猫、浣熊和老鼠中也可能检测出MAP亚种。此外，关于该病原体在临床上可能涉及人中的“克罗恩病”(“Crohn’sdisease”)存在着讨论。

自19世纪初就已知MAP病原体为副结核病的病原(causative agent)。副结核病是一种慢性肠道疾病，其会在数星期的时间导致持续的体重减轻。在最后的阶段，这种疾病会产生致命的结果。成年的家养反刍动物，如牛、绵羊和山羊，以及野生的反刍动物和动物园动物主要会被感染。通常，病原体的传播主要发生在新生的小牛和最多6个月大的小牛中。此处，感染大多不易察觉地发生并且通过口腔-粪便的途径无法察觉地转移，甚至被感染的奶牛的初乳会含有病原体。在伴随无规律且不可控的病原体分泌(pathogen excretion)的几年时间的潜伏期之后，该疾病通常先在年龄较大的母牛中出现。目前还没有治疗方法。过去，疫苗显示出了令人怀疑的结果，以至于它们目前在德国没有被使用。通常情况下，购买亚临床上表现(subclinically)感染的或被持久性感染的动物造成了畜群中的新感染。恰恰是临床上不显著的携带者和未识别的排菌者(excreters)是造成长期持续的家畜感染的重要原因。正是由于副结核病的广泛分布和经济损失，目前亟需改进的诊断方法和控制程序的开发。在德国，根据动物传染病法§78a 2款(§78a Art.2 of the Infectious AnimalDiseases Law)副结核病须予以具报。

副结核病的诊断是控制和早期识别副结核病的重要元素。已有依赖于例如基于抗体测试的各种测试方法和诊断方法。然而，商业上可获得的测试的一个问题是灵敏度和特异性的不足。此外，由于因这些测试的灵敏度不够而使血清学检测(serologically)阴性的排菌者可以保留在畜群中并因此可进一步传播疾病，基于抗体的测试是不适用的。