[发明专利]制造含有叔氨基的脂质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于制造含有叔氨基的脂质的方法。

背景技术

近年来，基因疗法成为能够预期在基因水平上使引起各种疾病的异常情况恢复和正常化的医学治疗。然而，基因是非常不稳定的。例如，在将基因原样给药的情形中，基因经历由体内的核酸酶等造成的分解。因此，用于基因疗法的载体的选择是非常重要的。

过去使用的病毒载体是表现出高度基因转移效率的有效载体。然而，已经报道了临床试验与死亡相关联的情况，使得对安全性存在顾虑。因此，具有高安全性和高基因导入效率的非病毒载体的开发已变成主流，并且已在世界各地进行积极研究。

非病毒载体包括诸如聚乙烯亚胺的阳离子聚合物与基因的复合物(多聚物-核酸复合物(polyplex))，和由阳离子脂质制成的脂质体与基因的复合物(脂质-核酸复合物(lipoplex))。

最重要的是，由于容易被官能化以便取决于所混合的脂质的类型而在血液中具有提高的持留性、积累到靶细胞等，脂质-核酸复合物是目前最通常使用的载体，并且极有希望进入实际应用。

对于脂质-核酸复合物的典型实例来说，Wheeler等报道了将含有用作致融脂质的二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、阳离子脂质等的稳定化的质粒脂质离子(SPLP)用聚乙二醇脂质包衣(NPL 1)。在所述报告中，对于阳离子脂质来说，为了提高药物递送效率，使用具有致融性质并含有一个不饱和键例如油烯基的脂质(例如DODAC(二油烯基二甲基氯化铵))。

此外，有报告指出，通过使用具有至少两个不饱和键例如亚油烯基并表现出提高的柔性的阳离子脂质，药物递送效率与以往相比进一步提高(PTL 1)。另外，存在着使用类似的阳离子脂质的报告(PTL 2)。

对于其中使用的阳离子脂质来说，脂质部分与具有阳离子基团的骨架使用醚基键合。与脂质部分和具有阳离子基团的骨架使用酯基键合的阳离子脂质等相反，由于不发生水解，因此表现出显著的稳定性。

一般来说，在合成这样的包含具有醚基的键的阳离子脂质的情形中，使用Williamson等的方法，其中将具有阳离子基团和羟基的化合物与具有离去基团的脂质化合物在有机溶剂中，在强碱存在下，在高温下反应。用于制造阳离子脂质化合物的具体方法的实例，包括从含有阳离子基团(二甲基氨基)的3-二甲基氨基-1，2-丙二醇和长链脂肪溴化物或长链脂肪甲磺酸酯，在芳香化合物溶剂例如苯、甲苯或二甲苯中，在强碱催化剂例如氢氧化钠或氢氧化钾存在下，在高温例如回流下进行的生产(PTL 1和2)。

总的来说，已知在分子中具有夹在两个顺式形式的双键之间的亚甲基的脂肪酸例如亚油酸，由于所述亚甲基具有高反应性，因此在高温、碱等的条件下容易被氧化并且容易异构化。所述异构化的脂肪酸(反式脂肪酸)表现出不同的生物活性。存在着例如过量摄入增加死亡风险的报告。因此，可能在体内发挥不利效应。

同时，已知具有一个双键的脂肪酸例如油酸，由于在所述双键的两侧包含亚甲基，因此也经历氧化，尽管反应性与亚油酸等的分子中夹在相邻的两个顺式形式的双键之间的亚甲基的反应性相比特别低，因此不容易发生异构化。

[引用文献列表]

[非专利文献]

[NPL 1]Wheeler等，基因治疗(Gene Therapy)6：271-281(1999)

[专利文献]

[PTL 1]日本未经审查的专利申请公布(PCT申请的翻译版本)No.2008-501729

[PTL 2]日本未经审查的专利申请公布(PCT申请的翻译版本)No.8-509953

发明内容

[技术问题]

也就是说，为了通过相关领域中的方法，通过在分子中具有夹在相邻的两个顺式形式的双键之间的亚甲基的化合物，例如亚油烯基团，的醚化获得含有叔氨基的阳离子脂质，需要高温和强碱条件。因此，存在着夹在顺式形式的双键之间的活性亚甲基的质子被容易地抽出，发生从顺式形式向反式形式的异构化，并且在目标物质中含有许多异构体的问题。

[解决问题的技术方案]

为了解决上述问题，本发明人进行了深入研究。结果，在分子中具有至少一个夹在相邻的两个顺式形式的双键之间的亚甲基的阳离子脂质的生产中，成功实现了从顺式形式向反式形式的异构化的显著抑制。

(1)一种用于制造含有叔氨基的脂质的方法，该方法包括：

使(A)由下述式(I)所表示的化合物

R¹-X  ...(I)