[发明专利]用于检测细胞样品中的活细胞的方法

权利要求书

1.一种检测液体样品中的活细胞的存在和/或数量的方法，该方法包括以下步骤：

(a)在将该液体样品通过基本上平面的多孔膜之后，如果有的话对由该多孔膜的至少一部分保留的活细胞用荧光标记物进行标记；

(b)通过相对于检测系统旋转所述多孔膜对所述多孔膜的所述部分进行扫描，该检测系统包括

(i)光源，该光源发射一束具有一波长的光，该波长被适配为激发是荧光标记物产生发射事件，以及

(ii)至少一个检测器，该至少一个检测器能够检测所述发射事件，

由此查询所述平面多孔膜的多个区域，并且检测通过与任何活细胞相关联的荧光标记物的激发而产生的发射事件；并且

(c)通过基于步骤(b)中检测的发射事件确定由所述膜捕获的活细胞的存在和/或数量。

2.如权利要求1所述的方法，其中，在步骤(a)中，使用活性染色剂和活性染色系统中的至少一者将所述细胞进行标记。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，该束光源发射具有在从大约350nm至大约1000nm范围内的波长的光。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述波长至少在从大约350nm至大约600nm和从大约600nm至大约750nm的范围内。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述检测器检测处于从大约350nm至大约1000nm范围内的发射光。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述光学检测器检测处于选自以下的至少一个范围内的发射光：从大约350nm至大约450nm、从大约450nm至大约550nm、从大约550nm至大约650nm、从大约650nm至大约750nm、从大约750nm至大约850nm、以及从大约850nm至大约950nm。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述多孔膜包括圆盘。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，当暴露于具有处于从大约350nm至大约1000nm范围内的波长的光时，所述多孔膜基本上是非自发荧光的。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述多孔膜具有高达大约100μm的平面度公差。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，所述多孔膜限定了具有平均直径的多个孔，该平均直径小于大约1μm从而允许流体穿过所述多孔膜同时将细胞保留在其上。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，所述多孔膜具有处于选自下组的范围内的厚度，该组由以下各项组成：从1μm至3,000μm；从10μm至2,000μm；以及从100μm至1,000μm。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，所述多孔膜布置于流体可渗透支撑构件上。

13.如权利要求12所述的方法，其中，所述支撑构件具有处于选自下组的范围内的厚度，该组由以下各项组成：从0.1mm至10mm；从0.5mm至5mm；以及从1mm至3mm。

14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，该方法进一步包括在所述多孔膜上捕获多种荧光颗粒，所述荧光颗粒在由来自所述光源的光激活时发射荧光事件。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，该方法进一步包括在所述液体样品的至少一部分中确定活细胞的数量。

16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，该方法进一步包括确定在所述可渗透膜上的所述活细胞的位置。

17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，该方法进一步包括在步骤(c)后，在允许由所述多孔膜捕获的所述活细胞的生长和/或增殖的条件下培养所述多孔膜。

18.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中，所述活细胞是微生物。

19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，该方法进一步包括对所述活细胞的属和/或种进行鉴定。

20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中，所述扫描步骤(b)包括用该束光示踪所述多孔膜上的嵌套圆形图案和螺旋图案中的至少一个。