[发明专利]大麻素修饰的核酸分子

说明书

发明内容

本发明涉及包含至少一个多不饱和脂肪酸残基，特别是花生四烯酸残基，更特别是大麻素(花生四烯酸乙醇胺)残基，以及与其共价结合的至少一个核苷组分，所述核苷组分选自核酸、核苷和核苷酸。该缀合物适合于高效率的细胞转染，所述细胞例如哺乳动物细胞包括人细胞。因此，提供了用于治疗性分子包括反义分子、siRNA分子、miRNA分子、拮抗剂或者这些分子的前体、以及治疗性核苷或核苷酸的新递送媒介物。

RNA干扰是一个功能强大的工具，其利用短RNA双链来抑制细胞中的特定蛋白质的形成(1-3)。在自然界中，沉默RNA分子由更大的转录物被Dicer复合物切割而产生(4)。然而对于生物技术应用，RNA分子(siRNA)是化学制备并施用的。将siRNA用作治疗剂的想法(5)在过去十年里被强烈地追求，但最主要的障碍是RNA双链体的差细胞摄取不能被克服(6)。目前，集中研究RNA递送系统，不同的如纳米粒子(7，8)、脂质体(9，10)或聚阳离子聚合物(11)。尽管在该领域有重大进展，然而，经常仍然是高毒性(12-14)和低细胞特异性，这代表未解决的问题。

最近，受体介导的内吞作用已演变为允许siRNA靶向特定细胞类型的备选递送策略(16-25)。该方法需要将siRNA连接至与细胞类型特异性受体结合的配体。这启动内化过程，导致RNA-配体缀合物的吸收。目前，该策略在胆固醇修饰的RNA(24)时最成功地执行。

在这里，我们报告此类受体介导的策略可成功用于解决敏感的细胞如神经细胞(26，27)和免疫细胞(28)至今很难被转染的问题。我们发现，存在于这两种细胞类型(29)上的大麻素受体可以用花生四烯酸乙醇酰胺(30,31)(大麻素)修饰的siRNA进行有效地靶向。

本发明的第一个方面是包含多不饱和脂肪酸残基和与其共价结合的核苷组分的缀合物，其中所述核苷组分选自核酸、核苷和核苷酸。

术语“缀合物”还包括盐，特别是药学上可接受的盐，如具有无机或有机酸或者碱的加成盐，如本领域所已知的。

缀合物包含至少一个多不饱和脂肪酸残基，特别是1-10，更特别是1-5个脂肪酸。甚至更特别的是，缀合物包含1或2个多不饱和脂肪酸残基。最特别的是，缀合物包含1个多不饱和脂肪酸残基。

在特定的实施例中，多不饱和脂肪酸残基是花生四烯酸(AA)残基，更特别是花生四烯酸乙醇酰胺(大麻素)酸残基。

在进一步的具体实施方式，附着至多不饱和脂肪酸残基的核苷组分是核酸分子，更特别的是RNA分子。

缀合物包含至少一个核苷组分，特别是1-25，更特别是2-20或2-10，和甚至更特别是2-8，即2、3、4、5、6、7或8个核苷组分。如果缀合物包含多于一个核苷组分，核苷组分可以是相同的或不同的。

在进一步的具体实施方式中，缀合物包含1个多不饱和脂肪酸残基，例如大麻素残基和2-20，特别是2-8，即2、3、4、5、6、7或8个核苷组分。

在一个实施方式中，缀合物可以具有线性结构。因此，核苷组分可以连接在线性链中，其中多不饱和脂肪酸残基可以存在于链中，在链的一端或链的两端。

在另一个实施方式中，缀合物具有分枝的结构，其中通过分枝的连接体将核苷组分结合至多不饱和脂肪酸残基，所述连接体例如树枝状连接体。

术语“多不饱和脂肪酸残基”包括游离脂肪酸残基，但也包括脂肪酸衍生物残基，特别是脂肪酸酯残基，或脂肪酸酰胺残基，脂肪酸磺酸酯残基，脂肪酸硫酸酯残基、脂肪酸膦酸酯残基、脂肪酸磷酸酯残基等。提供多不饱和脂肪酸残基具有至少一个核苷组分可以共价结合的功能基团。功能基团可以是脂肪酸的羧基或另一种功能基团，如存在于酯残基的醇上的功能基团或存在于胺残基的酰胺上的功能基团，如OH或NH₂基团。酯残基的醇部分可以例如为具有其他功能基团的C_1-5醇，如乙二醇、丙二醇或甘油。酰胺残基的胺部分可是具有其他功能基团的C_1-5胺，如乙醇胺、丙醇胺或乙二胺。

在缀合物中存在的多不饱和脂肪酸残基优选地是多不饱和C₁₆-C₂₄脂肪酸残基，特别是C₁₈、C₁₉、C₂₀、C₂₁或C₂₂脂肪酸残基，更特别是C₂₀脂肪酸残基。多不饱和脂肪酸残基具有至少2个C＝C键，特别是3、4、5或6个并且更特别是4个C＝C键。至少1-5，特别是4个C＝C键是以Z构型。更特别地，所有的双键是以Z构型。