[发明专利]糖蛋白酶介导位点特异性放射性标记的方法和组合物

权利要求书

1.一种标记糖蛋白的方法，所述方法包括：

a)提供一种包含末端GlcNAc残基的糖蛋白；

b)提供一种包含化学手柄的经过修饰的糖；

c)使糖蛋白与经过修饰的糖接触，其中所述的经过修饰的糖与末端GlcNAc残基连接，提供修饰糖蛋白；

d)提供包括金属离子螯合剂基团和反应性基团的标记分子；

e)使修饰糖蛋白与标记分子接触，其中所述反应性基团与化学手柄连接，提供标记糖蛋白；

f)提供放射性金属离子；及

g)使标记糖蛋白与放射性金属离子接触，其中所述金属离子与螯合剂基团缔合，提供放射性标记糖蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖蛋白包括抗体或Fc融合蛋白。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗体具有细胞相关抗原的亲和力。

4.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(c)之前，所述方法进一步包括以下步骤：提供包含带GlcNAc-GlcNAc键的低聚糖的糖蛋白；提供酶，以在GlcNAc-GlcNAc键处裂解低聚糖；使所述糖蛋白与酶接触，以提供包含带末端GlcNAc残基的糖蛋白。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述酶是糖类内切酶。

6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(c)之前，所述方法进一步包括以下步骤：提供包含带NeuAc-Gal-GlcNA键的低聚糖的糖蛋白；提供酶，以在NeuAc-Gal-GlcNA键处裂解低聚糖；使所述糖蛋白与酶接触，以提供包含带Gal-GlcNAc键的低聚糖的糖蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述酶是唾液酸酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤：提供包含带Gal-GlcNAc键的低聚糖的糖蛋白；提供酶，以在Gal-GlcNAc键处裂解低聚糖；使所述糖蛋白与酶接触，以提供包含带末端GlcNAc残基的糖蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述酶是β-半乳糖苷酶。

10.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(c)之前，所述方法进一步包括以下步骤：提供包含带Gal-GlcNAc键的低聚糖的糖蛋白；提供第二种酶，以在Gal-GlcNAc键处裂解低聚糖；使所述糖蛋白与第二种酶接触，以提供包含带末端GlcNAc残基的糖蛋白。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述酶是β-半乳糖苷酶。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述的经过修饰的糖通过突变体半乳糖转移酶与末端GlcNAc残基连接。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述突变体半乳糖转移酶是Y289L突变体半乳糖转移酶。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述化学手柄包括叠氮基团，所述反应性基团包括末端三芳基膦、末端炔烃或活化炔烃基团；或者所述化学手柄包括末端三芳基膦、末端炔烃或活化炔烃基团，所述反应性基团包括叠氮基团。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述活化炔烃包括二苯并环辛炔基团。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述化学手柄包括狄尔斯-阿尔德二烯，所述反应性基团包括狄尔斯-阿尔德亲双烯体；或所述化学手柄包括狄尔斯-阿尔德亲双烯体，所述反应性基团包括狄尔斯-阿尔德二烯。