[发明专利]表达鼠疫耶尔森氏菌F1‑V融合蛋白的伤寒沙门氏菌Ty21a及其用途

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2012年5月23日提交的美国临时申请61/650,676的优先权，所述临时申请以引用的形式全文纳入本文。

技术领域

本公开内容涉及开发用于产生针对鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)——鼠疫的致病菌——的保护作用的免疫原性组合物。本公开内容还涉及包含F1-V融合蛋白表达构建体的伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhi)菌株Ty21a，及其使用方法。

背景技术

鼠疫耶尔森氏菌是鼠疫的致病菌。历史上已记录了鼠疫的至少3次大流行，其杀死了近2亿人。鼠疫是人畜共患病(zoonotic disease)，通常通过被感染的跳蚤的叮咬传播。鼠疫耶尔森氏菌的天然贮存宿主包括啮齿目动物、松鼠和草原犬鼠(prairie dog)。目前，鼠疫耶尔森氏菌的大的贮存宿主存在于除了澳大利亚之外的所有主要人类栖息地(Sun et al.,J Infect Dev Ctries 5(9):614-627,2011)。鼠疫在世界上许多地方流行，包括非洲、中国、印度、南美部分地区和美国西南部(Yang et al.,J Immunol 178:1059-1067,2007；Leary et al.,Microb Pathog23:167-179,1997)。最近的流行病学研究表明，全世界每年有大约4000个人类鼠疫病例(Sun et al.,J Infect Dev Ctries 5(9):614-627,2011)。因此，鼠疫仍然是严重的公共健康问题。

鼠疫最常表现为腺鼠疫，其特征在于突然发热以及靠近跳蚤叮咬处的淋巴结肿痛(“炎性淋巴腺肿”)。用抗生素迅速治疗通常是有效的(Morton et al.,Vaccine 22:2524-2532,2004)。但是，细菌能够从跳蚤叮咬处广泛传播，并且在某些情况下，会感染肺部。如果肺部被感染，鼠疫可在由咳嗽或喷嚏所产生的气溶胶中传播，导致原发性肺鼠疫的爆发(Leary et al.,Microb Pathog 23:167-179,1997)。肺鼠疫是高度传染性的，并且通常是致命的(Morton et al.,Vaccine22:2524-2532,2004)。因为鼠疫是高度传染性的，并且能通过气雾化传播，鼠疫耶尔森氏菌被认为是潜在的生物武器(Sun et al.,J Infect Dev Ctries 5(9):614-627,2011；Yang et al.,J Immunol 178:1059-1067,2007)。

发明内容

本文公开了用于表达鼠疫耶尔森氏菌F1-V融合蛋白的质粒构建体的产生。还公开了包含所述公开的质粒构建体的肠道沙门氏菌血清变型伤寒沙门氏菌菌株Ty21a(称为“伤寒沙门氏菌Ty21a”或“Ty21a”)，例如用作抗鼠疫的疫苗。

本文提供了重组核酸分子，包含可操作地连接到诱导型启动子的鼠疫耶尔森氏菌F1-V融合蛋白编码序列，所述诱导型启动子在真核宿主细胞中具有活性，如大肠杆菌(Escherichia coli)htrA启动子。在某些实施方案中，所述核酸分子包含与SEQ ID NO:1的核苷酸1-1558至少85％相同的序列。在一些实施方案中，所述核酸分子还包含分泌信号肽编码序列(如大肠杆菌HlyA分泌信号序列)，其与F1-V融合蛋白编码序列框内融合。在具体的非限制性实施例中，所述核酸分子包含SEQ ID NO:1的序列。

还提供了包含所公开的核酸分子的质粒，以及包含所公开的核酸分子或质粒的伤寒沙门氏菌Ty21a细菌。

在一个非限制性实施方案中，提供了重组核酸分子，其包含与大肠杆菌htrA启动子序列可操作地连接的鼠疫耶尔森氏菌F1-V融合蛋白编码序列，以及与所述F1-V融合蛋白编码序列框内融合的大肠杆菌HlyA分泌信号肽编码序列，其中所述核酸分子的序列包含SEQ ID NO:1。还提供了包含所述核酸分子、复制起点、选择性标记以及大肠杆菌HlyB和HlyD蛋白编码序列的质粒。还提供了包含所述质粒的伤寒沙门氏菌Ty21a。

还提供了免疫原性组合物，其包括包含F1-V表达质粒的伤寒沙门氏菌Ty21a和可药用载体。