[发明专利]用于使基因表达沉默的组合物和方法

权利要求书

1.一种将外源裸dsRNA引入种子的方法，所述方法包括：

a. 用水洗涤所述种子2-6小时；

b. 在20-30℃的温度下干燥种子至多24小时；和

c. 使种子与包含1 μg/mL-261 μg/mL的裸dsRNA和0.1 mM EDTA的水溶液直接接触，其中裸dsRNA靶向内源植物基因或植物病毒病原体基因用于抑制，由此裸dsRNA渗透种子，从而将裸dsRNA引入种子中。

2.一种产生植物的方法，所述方法包括：

(a)按照权利要求1的方法将外源裸dsRNA引入种子中；和

(b)使种子萌发以产生植物。

3.一种调节自种子生长的植物中的基因表达的方法，所述方法包括：

(a) 用水洗涤所述种子2-6小时；

(b) 在20-30℃的温度下干燥种子至多24小时；

(c) 使种子与包含1 μg/mL-261 μg/mL的裸dsRNA和0.1 mM EDTA的水溶液直接接触，由此裸dsRNA渗透种子，从而将dsRNA引入种子中；和

(d) 自种子产生植物，其中裸dsRNA靶向内源植物基因或病毒植物病原体基因用于抑制。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述内源植物基因与对非生物胁迫或生物威迫的耐受性有关。

5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述接触通过在水溶液中浸泡种子进行，并且其中所述方法还包括在所述浸泡后将所述种子干燥。

6.权利要求4的方法，所述方法还包括在所述产生后使所述植物在非生物胁迫或生物胁迫下生长。

7.权利要求1或3的方法，其中设计所述裸dsRNA用于减量调节植物基因的表达。

8.权利要求7的方法，其中所述植物基因是内源基因。

9.权利要求1或3的方法，其中设计所述裸dsRNA用于减量调节病毒病原体基因的表达。

10.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述渗透是进入所述种子的胚乳中并且备选地或另外地进入所述种子的胚中。

11.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述裸dsRNA不整合至所述种子的基因组中。

12.权利要求1-3中任一项的方法，其中在萌发后所述裸dsRNA在植物中存在至少10天。

13.一种抑制植物病毒中目标基因的表达的方法，所述方法包括使植物病毒与通过权利要求2或3的方法产生的植物或植物部分接触，从而抑制植物病毒中目标基因的表达。

14.权利要求13的方法，所述方法还包括观察在所述提供后所述病毒病原体可感染性或可复制性的降低。

15.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述dsRNA包含siRNA。

16.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述接触通过将种子浸泡在所述水溶液中来实行。

17.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述洗涤在4-28℃下实行。

18.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述干燥在25-30℃下实行10-16小时。

19.权利要求1-3中任一项的方法，所述方法还包括在所述接触后用选自杀虫剂、杀真菌剂、肥料、涂布剂和着色剂的作用剂处理种子。