[发明专利]ERα/Src/PI3K复合物的检测作为乳腺癌的预测标志

说明书

本发明涉及确定乳腺癌预后的方法，涉及识别可能对抗雌激素类的治疗有响应的乳腺癌的方法，涉及使用Src/PI3K抑制剂的治疗和治疗乳腺癌患者的方法。

由于ERα在乳腺癌的发展和进展中起主要作用，已对雌激素信号传递途径进行了深入研究。目前乳腺癌的内分泌治疗主要基于靶向ERα信号传递途径:使用芳香酶抑制剂减少雌激素丰度，使用他莫昔芬和雷洛昔芬拮抗ERα功能或使用氟维司群下调ERα表达。然而，对内分泌治疗的抗性是成功治疗乳腺癌的一个主要障碍(Musgrove and Sutherland,2009)。存在实际的需求来寻找可预测对治疗的抗性的标志。迄今为止，细胞核中ERα表达是目前仅有的对内分泌治疗响应的已知的生物标志。因此，非基因ERα信号传递从未在临床实践中评估。我们之前报告了ERα在精氨酸260上的甲基化(通过精氨酸甲基转移酶PRMT1)，是其与Src、PI3K和黏着斑激酶(FAK)结合以及其下游效应物Akt活化的先决条件(Le Romancer M.等人，2010；LeRomancer M.等人，2008)。而且，我们已知该修饰在正常乳腺上皮细胞的细胞质中发生且在乳腺肿瘤的亚组中高度表达。然而，我们在一系列的164例乳腺癌中没有找到任何ERα甲基化和患者存活之间的关联(Le Romancer M.等人，2008)。

酪氨酸激酶Src也被认为是潜在靶点且Src抑制剂如达沙替尼或博舒替尼已在II期临床试验中测试(Araujo和Logothetis，2010)。然而，迄今为止效果十分令人失望。事实上，达沙替尼作为单一药物使用对患有TNBC的患者或具有严重治疗的转移性乳腺癌的患者具有有限的活性，且其发展成ERα-阳性肿瘤。然而，体外研究表明将抗雌激素和Src抑制剂组合增强了生长抑制。而且，临床试验正在将达沙替尼与其它治疗组合。

然而，即使一些临床研究给出了满意的结果，仍然对于识别生物标记存在真实的需求，该生物标记能预测哪些患者可受益于这些单独或组合的抑制剂。

发明内容

本发明的第一方面为确定患者中乳腺癌的预后的方法，包括以下步骤:

a)测量之前从所述患者获取的乳腺肿瘤样品的癌细胞的细胞质中ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平，

b)如果ERα/Src/PI3K蛋白复合物在所述癌细胞的细胞质中过表达，则将该乳腺癌分类为具有较差的预后。

在优选的实施方案中，该乳腺癌已被分类为ER+。

优选地，ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平通过使用抗ERα和抗Src抗体的邻位连接技术(Proximity Ligation Assay)检测ERα/Src蛋白复合物而测量，和/或ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平通过使用抗ERα和抗PI3K抗体的邻位连接技术检测ERα/PI3K蛋白复合物而测量。

在一个实施方案中，在步骤b)中将ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平与健康乳腺组织中ERα/Src/PI3K蛋白复合物的中值表达水平相比较。

在另一实施方案中，在步骤b)中将ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平与乳腺肿瘤样品中ERα/Src/PI3K蛋白复合物的中值表达水平相比较。

本发明的另一目的为识别可能对抗雌激素类的治疗和用Src抑制剂和/或PI3K抑制剂的治疗有响应的乳腺癌的方法，包括以下步骤:

a)测量之前从所述患者获取的乳腺肿瘤样品的癌细胞的细胞质中ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平，

b)如果该ERα/Src/PI3K蛋白质复合物在所述癌细胞的细胞质中过表达，则将该乳腺癌分类为可能对抗雌激素类的治疗和用Src抑制剂和/或PI3K抑制剂的治疗有响应的。

在一个实施方案中，该乳腺癌已被分类为ER+。

在另一实施方案中，该乳腺癌已被分类为ER-。

优选地，ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平通过使用抗ERα和抗Src抗体的邻位连接技术检测ERα/Src蛋白复合物而测量，和/或ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平通过使用抗ERα和抗PI3K抗体的邻位连接技术检测ERα/PI3K蛋白复合物而测量。

本发明进一步涉及包含Src抑制剂和/或PI3K抑制剂的组合物，其用于治疗乳腺癌患者的方法，其中所述用途包括以下步骤:

a)测量之前从所述患者获取的乳腺肿瘤样品的癌细胞的细胞质中ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平，