[发明专利]PCSK9肽疫苗

说明书

本发明涉及能在体内诱导针对PCSK9的抗体形成的疫苗。

本发明涉及新肽，其能影响蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin 9(Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9，PCSK9)-介导的低密度脂蛋白(LDL)受体(LDLR)的降解。所述的肽偶联于免疫原性载体配制成用于预防和/或治疗高脂血症，高胆固醇血症，动脉粥样硬化引起的PCSK9-相关的病症的疫苗。

心血管疾病(CVD)是世界范围内导致死亡的主要原因之一。高脂血症，高胆固醇血症，高血压和动脉粥样硬化之类的因素与这些疾病有关联。在流行病学综合研究中表明，血清胆固醇水平和CVD发生之间正相关。高LDL胆固醇(LDLc)水平构成高心血管风险，并且与升高的动脉粥样硬化风险直接相关。

LDLR，主要是肝LDLR，是从血浆中去除LDLc的主要途径。循环中的LDLc结合于LDLR，所形成的复合物通过网格蛋白-介导的胞吞作用(clathrin-mediated endocytosis)内化。随后，LDLc被降解，而LDLR循环返回细胞表面。

PCSK9是分泌型丝氨酸蛋白酶，其与LDLR结合并促进其降解。在2003年发现了与常染色体显性高胆固醇血症(ADH)相关的第三基因座。PCSK9的“功能获得突变”(“Gain of function mutations”,GOF)增强其与LDLR的相互作用，导致LDLR水平降低和明显较高的LDLc水平。因此，GOF与高胆固醇血症以及动脉粥样硬化倾向有关。相反，“功能丧失突变”(“Loss of function mutations”,LOF)导致LDLR水平升高和LDLc急剧减少，冠心病(CHD)风险随之减小。人PCSK9主要在肝脏，肠和肾脏中表达。其作为～72kDa的蛋白质合成出来，进行自催化切割，之后以～65kDa成熟蛋白质形式分泌。

循环PCSK9与LDLR的EGF-A结构域特异性结合。所述的复合物通过胞吞作用内化，而不是LDLR再循环返回细胞表面，从而，LDLR在溶酶体中降解。PCSK9-LDLR相互作用的净效果是可用于从血浆中清除LDLc的LDLR减少，表明PCSK9作为LDLR以至于LDLc代谢的调节物的重要性。

若干种动物研究证实PCSK9作为LDLc水平调节物的重要功能。在小鼠中腺病毒过表达PCSK9引起显著的循环LDLc增加。相反，与野生型动物相比，PCSK9-/-小鼠显示LDLR水平提高了2.8倍，LDLc减少至～50％。GOF和LOF突变指示PCSK9在调节人LDL代谢的重要作用，使得PCSK9成为引人关注的药物干预靶标。值得注意的是，PCSK9中LOF人杂合体似乎是健康的并具有正常的寿命。而且，有报道称，一位具有极低LDLc(14–34mg/dl)水平的31岁的健康非洲裔美国母亲是在PCSK9中具有两个失活突变的复合杂合体且无循环PCSK9。

临床前和临床试验检测出了若干种降低循环PCSK9，或抑制其与LDLR相互作用的化合物(如单克隆抗体，反义-寡核苷酸或自催化抑制剂)。尽管PCSK9在胞内和胞外皆作用于LDLR，靶定循环PCSK9是LDLc降低治疗学的重要途径。小鼠中的异种共生实验(Parabiosis experiments)以及重组蛋白质的施用已表明胞外PCSK9足以减少肝LDLR的数量。更重要地，利用PCSK9-特异性单克隆抗体(mAbs)的人临床实验研究结果表明，靶定PCSK9能有效且安全地减少LDLc。此外，最近成功地完成了评估靶定PCSK9安全性和效力的若干临床实验。

WO 2012/059573 A1和WO 2011/027257 A2公开了作为疫苗的PCSK9多肽片段。Li等，(Rec.Pat.DNA&Gene Seq.3(2009),201-212)和Wierzbicki等，(Exp.Op.Invest.Drugs 21(2012),667-676)报道了关于抑制PCSK9用于治疗高脂血症近期发展。