[发明专利]减毒的猪流感疫苗及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种减毒的猪流感毒株，其能够在猪中提供针对剧毒H3N2猪流感或由H3N2猪流感引起的疾病的安全有效的免疫应答；

其中所述毒株编码相对于其对应的剧毒亲本株由4个或5个另外的糖基化位点组成的HA蛋白质；

其中所述剧毒亲本株编码由如SEQ ID NO:18所示的多肽序列组成的HA蛋白质；并且

其中所述糖基化位点是S71N、K90N、L173T和P287T，或者S71N、K90N、L173T、P287T和K294T。

2.权利要求1的毒株，其包含编码由如SEQ ID NO:22所示的多肽序列组成的HA蛋白质的HA基因。

3.权利要求1的毒株，其编码相对于其对应的剧毒亲本株只具有5个另外的糖基化位点的HA蛋白质。

4.权利要求1的毒株，其中所述剧毒亲本株是H1N1A/swine/North Carolina/3793/08，其包含或由如下核苷酸序列组成：SEQ ID NO:1、3、5、9、11、13、15和17。

5.权利要求2的毒株，其中所述剧毒亲本株是H1N1A/swine/North Carolina/3793/08，其包含或由编码如下序列的核苷酸序列组成：SEQ ID NO:2、4、6、10、12、14、16和18。

6.权利要求3的毒株，其中所述剧毒亲本株是H1N1A/swine/North Carolina/3793/08，其包含或由编码如下序列的核苷酸序列组成：SEQ ID NO:2、4、6、10、12、14、16和18。

7.一种免疫组合物，其包含权利要求1的毒株。

8.一种免疫组合物，其包含权利要求2的毒株。

9.一种免疫组合物，其包含权利要求3的毒株。

10.权利要求9的组合物，其进一步包含药学或兽医学可接受的赋形剂，并且其在猪中提供针对剧毒H3N2猪流感攻击的保护性免疫应答。

11.权利要求10的组合物，其进一步包含与除H3N2猪流感外的猪病原体相关或衍生自除猪流感外的猪病原体的至少一种另外的抗原。

12.权利要求11的组合物，其中所述至少一种另外的抗原能够在猪中引发针对猪肺炎支原体(M.hyo)、猪环状病毒2(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)或能够在猪中感染且引起疾病或对疾病的敏感性的其他病原体的免疫应答。

13.权利要求9的组合物在制备疫苗中的用途，所述疫苗用于给需要针对H3N2猪流感的保护的猪接种疫苗。

14.权利要求13的用途，其中所述猪是分娩前3周至6周的母猪。

15.权利要求14的用途，其中与来自未接种疫苗的母猪的仔猪相比较，所述所得到的仔猪具有降低的发病率和/或死亡率。

16.一种包含用于产生权利要求1的减毒的猪流感毒株的多种载体的组合物，所述多种载体包括包含与H3N2流感病毒HA cDNA可操作地连接的启动子的载体，其中相对于由对应的剧毒亲本猪流感毒株编码的HA，所述HA cDNA编码4个或5个另外的糖基化位点。

17.权利要求16的组合物，其中所述另外的糖基化位点是S71N、K90N、L173T和P287T；或者S71N、K90N、L173T、P287T和K294T，并且所述氨基酸变化的数是基于由具有如SEQ ID NO:18所示的多肽序列的剧毒亲本株编码的HA蛋白质。

18.权利要求17的组合物，其中用于产生减毒流感的所述HA cDNA编码如SEQ ID NO:22或24所示的蛋白质。

19.一种制备猪流感病毒的减毒株的方法，其中所述减毒株能够在猪中提供针对剧毒H3N2流感株的安全有效的免疫应答，所述方法包括：使细胞与对于获得传染性流感病毒有效的量的权利要求18中任一项的组合物接触，从而制备所述减毒株。

20.一种包含用于产生权利要求1的减毒的猪流感毒株的多种载体的细胞，所述多种载体包括包含与H3N2流感病毒HA cDNA可操作地连接的启动子的载体，其中相对于由对应的剧毒亲本猪流感毒株编码的HA，所述HA cDNA编码4个或5个另外的糖基化位点。