[发明专利]包含CD95-Fc同种型的混合物的组合物

说明书

描述

本发明涉及包含融合蛋白同种型的混合物的组合物，其中每个融合蛋白包含细胞外CD95结构域或其功能片段和Fc结构域或其功能片段；以稳定形式提供这样的组合物的制剂；以及用于产生这样的组合物的方法。

在PCT/EP04/03239中描述了包含与免疫球蛋白Fc结构域相融合的死亡受体CD95(Apo-1；Fas)的细胞外结构域的融合蛋白。但是，具有足够稳定性地以足够的量提供这样的融合蛋白经证明是困难的。

通过本发明，首次可能提供这样的组合物或方法。

根据第一个方面，本发明涉及包含融合蛋白同种型的混合物的组合物，每个融合蛋白包含至少一个细胞外CD95结构域(APO-1；Fas)或其功能片段和至少一个为在大约4.0至大约8.5的pI范围之内分布的Fc结构域或其功能片段的第二结构域。因此，本文中所使用的细胞外CD95结构域也可以称为“第一结构域”，而所述Fc结构域可以称为“第二结构域”。

第一结构域蛋白为细胞外CD95结构域，优选地哺乳动物的细胞外结构域，特别是人的蛋白，即人的细胞外CD95结构域。所述融合蛋白的第一结构域，即细胞外CD95结构域，优选地包含直至人CD95的氨基酸170、171、172或173的氨基酸序列(SEQ ID NO.1)。信号肽(例如，SEQ ID NO:1的位置1-25)可以存在或不存在。

特别地对于治疗目的，人的蛋白的使用是优选的。

所述融合蛋白可以包含一个或多个第一结构域，其可以是相同或不同的。但是，一个第一结构域，即包含一个细胞外CD95结构域的融合蛋白，是优选的。

根据一个优选的实施方案，所述Fc结构域或其功能片段，即根据本发明的融合蛋白的第二结构域，包含CH2和/或CH3结构域，和可选地至少一部分的铰链区结构域或从其衍生的经修饰的免疫球蛋白结构域。所述免疫球蛋白结构域可以为IgG、IgM、IgD或IgE免疫球蛋白结构域，或者从其衍生的经修饰的免疫球蛋白结构域。优选地，第二结构域包含至少一部分的恒定IgG免疫球蛋白结构域。所述IgG免疫球蛋白结构域可以选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4结构域，或者选自来自其的经修饰的结构域。优选地，第二结构域为人的Fc结构域，例如IgG Fc结构域，例如人的IgG1Fc结构域。

所述融合蛋白可以包含一个或多个第二结构域，其可以是相同或不同的。但是，一个第二结构域，即包含一个Fc结构域的融合蛋白，是优选的。

进一步地，第一和第二结构域两者优选地来自相同的物种。

第一结构域，即所述细胞外CD95结构域或其功能片段，可以位于N-末端或C-末端。第二结构域，即所述Fc结构域或其功能片段，也可以位于所述融合蛋白的C-末端或N-末端。但是，在所述融合蛋白的N-末端处的细胞外CD95结构域是优选的。

根据一个进一步的优选的实施方案，所述融合蛋白为APG101(CD95-Fc，SEQ ID NO:1中的位置26-400)。如由SEQ ID NO:1所定义的，APG101可以为这样的融合蛋白，其包含人的细胞外CD95结构域(氨基酸26-172)和人的IgG1Fc结构域(氨基酸172-400)，进一步可选地包含N-末端信号肽(例如，SEQ ID NO:1的氨基酸1-25)。信号肽的存在指明了APG101的未成熟形式。在成熟过程中，信号肽被切除。根据一个特别优选的实施方案，信号序列被切除。具有信号序列的APG101也被术语“未修饰的APG101”所包括。在一个进一步的实施方案中，所述融合蛋白为与APG101具有至少70％同一性，更优选地75％同一性、80％同一性、85％同一性、90％同一性、95％同一性、96％同一性、97％同一性、98％同一性、99％同一性的多肽。根据本申请，术语“同一性”涉及所比较的两个氨基酸序列是不变的(换言之，在相同的位置处共享相同的氨基酸)的程度。

术语“APG101”描述了SEQ ID NO:1的位置26-400的融合蛋白，具有和/或没有信号肽。术语“APG101”还包括这样的融合蛋白，其包含在N-末端处截短的形式的CD95细胞外结构域。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明的融合蛋白为APG101的功能片段。如在本文中所使用的，术语“片段”通常意指“功能片段”，即野生型或全长蛋白质的片段或部分，其具有与相应的野生型或全长蛋白质基本上相同的生物学活性和/或特性。