[发明专利]灭活钩端螺旋体属细菌的免疫原性组合物

说明书

发明领域

本发明涉及一种组合物，其包含灭活钩端螺旋体(Leptospira)细菌的免疫原性细胞制剂，一种保护动物预防钩端螺旋体属细菌感染的疫苗，以及一种酸用于稳定灭活钩端螺旋体属细菌的免疫原性制剂的用途。

技术背景

钩端螺旋体病是由钩端螺旋体的许多致病血清变型中的任一种感染引起的世界范围的人畜共患病。所述生物的属是极其易变的，并且包含超过250个血清变型。单个致病性血清变型的发病率因不同地区而异，可能受如气候、当地动物群和农业实践等因素的影响。钩端螺旋体病实际上影响到所有的哺乳动物物种。人类钩端螺旋体病也很重要，并且在热带地方性发生，且在温带气候中作为流行病发生。然而，与其他物种不同，人类实质上对于所述疾病的维持并不重要，并且人对人的传播很罕见。

预防钩端螺旋体病的人疫苗接种是研究团体的目标，但是进展一直非常缓慢。鉴于犬钩端螺旋体病是一种重要的疾病，并且犬是钩端螺旋体病来源的事实，预防该犬疾病的许多疫苗是可得的。商业的犬钩端螺旋体病疫苗传统上包含犬(Canicola)血清组和黄疸出血性(Ictero)血清组的灭活抗原，并且已面市超过五十年。欧洲最近的建议是继续在疫苗中包含Canicola和Ictero血清组的抗原，附加包含流感伤寒(Grippo)血清组和澳大利亚(Australis)血清组的抗原。而在美国，目前可获得具有四种血清组(Canicola、ictero、Grippo和Pomona)的抗原的四种犬疫苗；在欧洲，目前可获得多种传统二价疫苗(Canicola、Ictero)和仅一种三价疫苗(Canicola、Ictero和Grippo)。

即使不是全部如此，大多数可商购的钩端螺旋体病疫苗包括灭活钩端螺旋体细菌的免疫原性细胞制剂，例如，如福尔马林灭活的全细胞。已知这些疫苗在远低于室温的贮存温度，通常在2℃至8℃之间，非常稳定。然而，特别是考虑到一个事实，即钩体螺旋体病是热带的地方病，在高于室温的温度下具有疫苗稳定性将是一个重要的优点，因为这将允许在环境条件下贮存，而不需要任何冷却设备。在过去，因为存在于这类灭活的全细胞疫苗中的任何蛋白可能是钩端螺旋体抗原不稳定的原因，已经测试了将这些蛋白变性(例如通过施加不影响钩端螺旋体抗原的热激处理)是否导致稳定性的显著改善。然而，结果是阴性的。

发明目的

需要显著提高包含灭活钩端螺旋体细菌的免疫原性细胞制剂的组合物的稳定性，特别是获得一种组合物，其即使是在高于室温的温度下贮存至少3个月后，仍然有效引起免疫应答。特别地，需要一种钩端螺旋体病疫苗，即使在将所述疫苗在37℃下贮存3个月后，特别是在该温度下贮存9个月后，其仍然有效，至少帮助防止钩端螺旋体细菌感染。

发明概述

为了满足本发明的目的，已根据前文设计了一种组合物，其中所述灭活钩端螺旋体细菌的免疫原性细胞制剂存在于乙二胺四乙酸溶液中(其中术语“酸”包括所述酸的共轭碱)。已经证明，通过使所述抗原存在于该溶液中，所述抗原的稳定性显著提高。在37℃下贮存至少3个月的根据本发明的疫苗，保留了足以提供预防钩端螺旋体细菌感染的近乎完全保护的抗原质量水平。

定义

本发明意义上的疫苗是一种适合应用于动物(包括人类)的构成，包括一种或多种抗原，通常与药学上可接受的载体组合，例如含有水的液体，任选包含免疫刺激剂(佐剂)、盐、缓冲剂、防腐剂、粘度调节剂等，其在施用于动物后诱导免疫应答，用于治疗疾病或病症，即帮助预防、改善或治疗疾病或病症。

载体是用于携载抗原以使其能够以实用形式存在的工具。典型的载体是水或其它亲水性液体，但也常使用固体颗粒(例如用于通过干粉雾化器施用的抗原)。

灭活细菌的细胞制剂是实质上含有灭活细菌细胞的制剂，任选地被进一步处理(其可包括至少部分裂解细胞)，例如以获得更稳定的或免疫原性更高的制剂。细胞制剂与包含细菌细胞的提取物(例如提取的表面蛋白和/或多糖)的制剂是相对的。

本发明的具体实施方式

在一个具体实施方式中，所述溶液每升包含5至50mmol的乙二胺四乙酸。优选地，所述溶液每升包含20mmol的乙二胺四乙酸。已经证实该范围导致有效提高稳定性，并同时预期在施用后是安全的。

在另一个具体实施方式中，所述溶液含有磷酸氢二钠。