[发明专利]标记疫苗

说明书

本发明涉及在病毒蛋白质的表位中具有修饰的可复制的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、古典猪瘟病毒(CSFV)、羊边界病病毒(BDV)和非典型瘟病毒，其作为药物的用途，作为疫苗的用途，包含此类可复制的BVDV、CSFV、非典型瘟病毒或BDV的疫苗，以及用于检测针对此类病毒的抗体和区分已接种疫苗的动物与野外感染的动物的诊断测试。

瘟病毒属(Pestivirus)是在黄病毒科(Flaviviridae)内的属，其尤其(i.a.)包含牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、古典猪瘟病毒(CSFV)、羊边界病病毒(BDV)和称为非典型瘟病毒的一组病毒，例如HoBi病毒和Khon Kaen病毒。

BVDV、CSFV、非典型瘟病毒或BDV可以诱导在全世界具有显著经济损失的严重疾病。

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)，其为牛病毒性腹泻的病原体的瘟病毒成员，是全世界经济上重要的牛疾病。由BVDV感染引起的重大经济损失是生育能力降低、流产和产生持续感染的小牛，其可以发展出致命性“粘膜病”。

CSFV引起古典猪瘟，在猪中高度传染性和有时致命性的疾病，其可以引起显著经济损失。

边界病(BD)是绵羊和山羊的先天性病毒疾病。绵羊中最常见的临床体征包括不育性母羊、流产、死胎和弱小羔羊的出生。

CSFV、BVDV、非典型瘟病毒和羊边界病病毒是遗传和结构上紧密相关的。

动物可以通过疫苗接种，尤其是保护预防CSFV和BVDV：保护猪和牛预防例如CSFV和BVDV感染的常规灭活或经修饰的活疫苗是本领域已知的，并且是商购可得的。

瘟病毒基因组由正向的单链RNA组成。所述RNA具有至少12.3 kb的长度且含有一个大开放读码框(ORF)，其侧翼为在两个基因组末端处的非翻译区(NTR)。瘟病毒ORF翻译成一个多蛋白，其通过病毒和细胞蛋白酶共翻译且翻译后加工成至少12种成熟蛋白质。

瘟病毒ORF的第一种蛋白质为N^pro (N末端蛋白酶)。N^pro是非结构性自身蛋白酶(autoprotease)，其将自身与ORF编码的多蛋白的剩余部分切开，并且从而产生其自身的C末端以及ORF中的第一种结构蛋白(C (核心)蛋白)的正确N末端。

ORF中的C蛋白随后为其他结构蛋白：E^RNS、E1、E2 (以该次序)。衣壳(C)蛋白和三种糖基化的包膜蛋白(E^RNS、E1、E2)一起构成瘟病毒的病毒粒子。结构蛋白随后为非结构蛋白(p7、NS2-NS3和NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。NS3 (丝氨酸蛋白酶)和NS5 (RNA依赖性RNA聚合酶活性)直接参与病毒复制。

关于瘟病毒复制的研究已通过反向遗传学系统和自主复制亚基因组RNA (复制子)的发现而得到相当大促进                                                ，Lamp, B.(2011))。

例如通过制备缺乏结构蛋白的基因序列的缺陷型CSFV基因组来研究CSFV复制的最低限度要求。发现缺陷型CSFV基因组仍复制，并且当连同辅助A187-CAT RNA一起引入SK-6细胞内时，可以包装成病毒颗粒(Moser等人，(1999))。

缺乏Npro基因序列的一部分以及编码C、E^rns、E1、E2、p7和NS2的基因的自主复制的缺陷型BVDV基因组已由Behrens等人(1998)进行描述。

目前，在瘟病毒引起经济损害的不同国家应用不同方法处理瘟病毒感染。然而，将这些不同方法平行使用的事实引起问题，如下文对于BVDV举例说明的。然而，该问题是所有瘟病毒的普遍问题。

BVDV和BDV在饲养反刍动物的全世界的所有国家出现，只有几个国家例外。

瘟病毒同样在野生动物中循环，并且这些因此构成储库，病毒可以由该储库泄漏到驯养家畜内。

BVDV诊断测试的开发已使得能够检测BVDV感染的兽群，并且追踪且去除持续感染的动物。

与严格迁移限制和卫生措施组合，这种开发结果已允许斯堪的纳维亚国家实际上从驯养家畜中根除BVDV。然而，因此，疫苗接种目前在这些国家中已禁用。