[发明专利]用于执行热熔分析和扩增的装置、系统和方法

说明书

背景技术

1.技术领域

本发明涉及用于在多个反应容器的每一个中执行多重热熔分析程序的系统和方法。

2.背景技术

本文描述或涉及的任何参考文献均不认为是相对受权利要求书保护的本发明的现有技术。

诊断分析广泛用于临床诊断和健康科学研究，以检测生物体或生物样品中的生物抗原、细胞或遗传异常、疾病状态以及疾病相关病原体或基因突变的存在或对它们的量进行定量。在诊断分析允许定量时，专业人员能够更好地计算感染或疾病的程度，并确定疾病随时间推移的状态。诊断分析在很多情况下集中于检测所关注的化学物质、蛋白质或多糖抗原、核酸、生物聚合物、细胞或组织。可以采用多种分析检测这些诊断指标。

具体地讲，基于核酸的分析通常包括用于对样品中一个或多个靶标核酸序列进行检测或量化的多个步骤。靶标核酸序列通常对细胞、组织、生物体或病毒的可识别群组具有特异性，其中所述群组由至少一个核酸共有序列限定，该序列为群组成员所共有，并且针对待分析样品中的该群组具有特异性。多种基于核酸的检测方法在Kohne的美国专利No.4,851,330和Hogan的美国专利No.5,541,308进行了充分描述，这些专利中每一个的公开内容据此以引用方式并入。

例如，部分通过使样品暴露于探针来执行基于核酸的分析，该探针被配置以在特定杂交条件下对属于所关注的蛋白质、细胞、组织、生物体或病毒的核酸序列表现出特异性。通常对样品进行一定程度的处理，从而以使其适于杂交的方式提取核酸。

在将靶标核酸暴露于探针之前或之后，可通过靶标捕获方法，使用键合到诸如磁珠的基底上的“捕获探针”直接地或间接地固定靶标核酸。靶标捕获探针通常为能够与包含靶标序列的核酸序列杂交的较短核酸序列(即寡核苷酸)。当磁珠包括捕获探针时，使用靠近反应器皿的磁体将磁珠吸引到并保持在器皿的侧面。一旦靶标核酸因此固定，可通过例如从反应器皿抽吸流体并任选地执行一个或多个洗涤步骤，使杂交核酸与样品中存在的非杂交核酸分离。

在大多数情况下，希望使用本领域所熟知的若干核酸扩增程序中的任一种扩增靶标序列。核酸扩增的方法在文献中进行了详尽描述。PCR扩增例如在Mullis等人的美国专利No.4,683,195、4,683,202和4,800,159以及Methods in Enzymology,155:335-350(1987)(《酶学方法》，第155卷，第335-350页，1987年)中有所描述，这些文献中每一个的公开内容据此以引用方式并入。SDA的例子可见于Walker,PCR Methods and Applications,3:25-30(1993)(Walker，《PCR方法和应用》，第3卷，第25-30页，1993年)、Walker et al.in Nucleic Acids Res.,20:1691-1996(1992)(Walker等人，《核酸研究》，第20卷，第1691-1996页，1992年)以及Proc.Natl.Acad.Sci.,89:392-396(1991)(《美国科学院院报》，第89卷，第392-396页，1991年)。LCR在美国专利No.5,427,930和5,686,272中有所描述，这些专利中每一个的公开内容据此以引用方式并入。转录相关扩增(“TAA”)形式的例子在例如Burg等人的美国专利No.5,437,990、Kacian等人的美国专利No.5,399,491和5,554,516、以及Gingeras等人的国际申请No.PCT/US87/01966(出版为国际公布No.WO 88/01302)和国际申请No.PCT/US88/02108(出版为国际公布No.WO 88/10315)中有所提供，这些专利中每一个的公开内容据此以引用方式并入。

靶标核酸序列的检测通常需要使用具有与靶标序列或其扩增子的至少一部分基本上互补的核苷酸碱基序列的核酸分子。在选择性分析条件下，探针将以允许专业人员检测样品中靶标序列的存在的方式杂交到靶标序列或其扩增子。有效探针制备的技术在本领域中是已知的。然而，一般来讲，有效探针被设计用于防止与自身或任何将会妨碍检测靶标序列存在的核酸分子的非特异性杂交。探针可包括例如能够检测的标记，其中标记为例如放射标记物、荧光团或荧光染料、生物素、酶、化学发光化合物或本领域已知的其他类型的可检测信号。