[发明专利]生产环肽的方法

说明书

本发明涉及生产环肽化合物或其盐的方法，所述方法包括：使环脂肽化合物或其盐与来源于属于Pseudomonas属的微生物的酰基转移酶接触，以使所述环脂肽的脂质酰基部分脱酰基。

发明领域

本发明涉及通过借助于酰基转移酶使环脂肽的酰基链脱酰基从而生产环肽化合物或其盐的方法。

发明背景

环肽或环状肽是其中末端氨基和末端羧基形成内部肽键的多肽。一些环肽因它们的有益药物属性而众所周知。在自然界中，环肽的长度可从仅几个氨基酸至数百个氨基酸。环肽可以是天然存在的化合物，但也可以通过全合成获得或者通过天然存在或被天然产生的前体的合成或基因修饰来获得。后一类被称为半合成环肽。当环肽带有一个或多个脂质尾或酰基链时，这种环肽被称为环脂肽(cyclic lipopeptide)。具有抗生素活性的环脂肽化合物例如达托霉素和安福霉素，环脂肽的一个极佳实例是棘白菌素(echinocandins)类，它们是有效的抗真菌剂。棘白菌素是带有N-连接的酰基脂质侧链且分子量约为1200Da的两亲性六肽。药学上有用的棘白菌素的实例是环六肽阿尼芬净(anidulafungin)、卡泊芬净(caspofungin)、西洛芬净(cilofungin)和米卡芬净(micafungin)，它们在治疗真菌感染(尤其是由Aspergillus,Blastomyces,Candida,Coccidioides和Histoplasma引起的那些)中有用。阿尼芬净(1-[(4R,5R)-4,5-二羟基-N2-[[4-(戊氧基)[1,1':4',1-三联苯]-4-基]羰基]-L-鸟氨酸]棘白菌素B)、卡泊芬净(1-[(4R,5S)-5-[(2-氨乙基)氨基]-N2-(10,12-二甲基-1-氧代十四烷基)-4-羟基-L-鸟氨酸]-5-[(3R)-3-羟基-L-鸟氨酸]-纽莫康定B₀)和米卡芬净(1-[(4R,5R)-4,5-二羟基-N2-[4-[5-[4-(戊氧基)苯基]-3-异恶唑基]苯甲酰基]-L-鸟氨酸]-4-[(4S)-4-羟基-4-[4-羟基-3-(磺酰氧基)苯基]-L-苏氨酸]纽莫康定A₀)均为半合成环六肽，它们可衍生自天然存在的棘白菌素，例如棘白菌素B、纽莫康定A₀、纽莫康定B₀或FR 901379。

天然环脂肽通常由微生物产生。达托霉素由土壤细菌Streptomyces roseosporus产生。安福霉素由Streptomyces canus产生。天然棘白菌素(例如棘白菌素B,棘白菌素C,阿枯菌素Aγ,纽莫康定B₀和FR 901379)也通常由多种微生物产生。例如，棘白菌素B由真菌Aspergillus nidulans产生，FR 901379由真菌Coleophoma empetri产生。

环脂肽的酰基链已被证明是抗真菌活性和毒性的重要决定因素(Debono M.&Gordee R.S.,Annu.Rev.Microbiol.48,471(1994))。例如，天然存在的环状抗真菌脂肽FR901379带有附接在N-末端的脂肪酸酰基基团，它展示出有效的体内抗真菌活性(Iwamoto,T.,Fujie A.,Nitta,K.,Hashimoto,S.,Okuhara,M.,Kohsaka,M.,J.Antibiot.47,1092(1994))。不幸的是，就像一些其它天然存在的棘白菌素一样，FR 901379也显示出高溶血活性。酶法移除脂肪酸链并替换为辛氧基苯甲酰基酰基链显示：FR 901379的原始活性被保留，但溶血活性显著降低。另一个实例是米卡芬净，其是通过将FR 901379的脂质尾交换成复杂的3,5-二苯基取代异恶唑酰基基团产生的(Fujie,Pure Appl.Chem.79,4期,603-614页(2007))。因此，环脂肽的天然酰基链的脱酰基允许引入替换性侧链，这改善抗真菌效力和降低溶血活性。