[发明专利]包含异源多肽的基于CYAA的嵌合蛋白及其在诱导免疫应答中的应用

权利要求书

1.一种编码无细胞毒性的嵌合蛋白的嵌合多核苷酸，所述多核苷酸由以下构成：

从5'至3'，(a)编码如SEQ ID NO：2所示的百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)CyaA蛋白片段的多核苷酸，所述片段的序列起始于SEQ ID NO：2的第一个残基，并终止于位于SEQ ID NO：2的第183位至第227位之间的一个残基；

(b)编码含有HPV E7抗原或其抗原片段的异源多肽的多核苷酸，其中所述异源多肽具有负的静电荷；以及

(c)编码如SEQ ID NO：2所示的百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)CyaA蛋白片段的多核苷酸，所述片段的序列起始于位于SEQ ID NO：2的第321位至第387位中的一个残基，并终止于SEQ ID NO：2的最后一个残基。

2.如权利要求1所述的编码无细胞毒性的嵌合蛋白的嵌合多核苷酸，所述嵌合多核苷酸选自于由以下构成的组：

1)由以下构成的多核苷酸：从5'至3'，(a)编码由SEQ ID NO：2的残基1至227构成的多肽片段的多核苷酸，(b)编码含有HPV E7抗原或其抗原片段的异源多肽的多核苷酸，其中所述异源多肽具有负的静电荷，以及(c)编码由SEQ ID NO：2的残基321至1706构成的多肽片段的多核苷酸；

2)由以下构成的多核苷酸：从5'至3'，(a)编码由SEQ ID NO：2的残基1至183构成的多肽片段的多核苷酸，(b)编码含有HPV E7抗原或其抗原片段的异源多肽的多核苷酸，其中所述异源多肽具有负的静电荷，以及(c)编码由SEQ ID NO：2的残基387至1706构成的多肽片段的多核苷酸；

3)由以下构成的多核苷酸：从5'至3'，(a)编码由SEQ ID NO：2的残基1至227构成的多肽片段的多核苷酸，(b)编码含有HPV E7抗原或其抗原片段的异源多肽的多核苷酸，其中所述异源多肽具有负的静电荷，以及(c)编码由SEQ ID NO：2的残基387至1706构成的多肽片段的多核苷酸；和

4)由以下构成的多核苷酸：从5'至3'，(a)编码由SEQ ID NO：2的残基1至183构成的多肽片段的多核苷酸，(b)编码含有HPV E7抗原或其抗原片段的异源多肽的多核苷酸，其中所述异源多肽具有负的静电荷，以及(c)编码由SEQ ID NO：2的残基321至1706构成的多肽片段的多核苷酸。

3.如权利要求1或2所述的编码无细胞毒性的嵌合蛋白的嵌合多核苷酸，其中，所述嵌合蛋白能结合至靶细胞和/或将其腺苷酸环化酶结构域转运至靶细胞的细胞溶质中。

4.一种编码无细胞毒性的嵌合蛋白的嵌合多核苷酸，其特征在于，在权利要求1或2所述的嵌合多核苷酸3’端进一步连接编码博德特氏菌(Bordetella)菌株的CyaC蛋白的多核苷酸。

5.一种编码无细胞毒性的嵌合蛋白的嵌合多核苷酸，其特征在于，在权利要求1或2所述的嵌合多核苷酸3’端进一步连接编码百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)菌株的CyaC蛋白的多核苷酸。

6.权利要求1所述的嵌合多核苷酸在制备嵌合蛋白中的应用，所述嵌合蛋白由以下构成：CyaA衍生蛋白和含有HPV E7抗原或其抗原片段的异源多肽，其中所述异源多肽具有负的静电荷；

其中，编码所述异源多肽的多核苷酸在如下所述的CyaA蛋白的片段1)和2)之间被克隆，

所述CyaA衍生蛋白由以下构成：

1)如SEQ ID NO：2所示的百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)CyaA蛋白的片段，所述片段由起始于SEQ ID NO：2的第一个残基，并终止于位于SEQ ID NO：2的第183位至第227位中的一个残基的序列构成；

且融合至

2)如SEQ ID NO：2所示的百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)CyaA蛋白的片段，所述片段由起始于位于SEQ ID NO：2的第321位至第387位中的一个残基，并终止于SEQID NO：2的最后一个残基的序列构成。